Qiagen, 301425, Reactivo de transfección Effectene (1 ml)

1 ml de reactivo Effectene, potenciador, tampón; para 40 transfecciones en placas de 60 mm o 160 transfecciones en placas de 12 pocillos

Características

- Alta eficiencia en presencia de suero.
- Transfección eficiente con bajas cantidades de ADN
- Citotoxicidad mucho menor y más suave que muchas alternativas.
- Adecuado para cribado de alto rendimiento

Actuación

Se logra una mayor eficiencia de transfección del ADN plasmídico con el reactivo de transfección Effectene que con otros reactivos cuando se utiliza con los procedimientos recomendados (véase la figura "Alta eficiencia de transfección con el reactivo Effectene"). El reactivo de transfección Effectene es adecuado para la transfección de líneas celulares sensibles con oligonucleótidos (véase la figura "Transfección de oligonucleótidos con el reactivo Effectene") y es especialmente eficaz para células primarias (véase la figura "Eficiencia de transfección del 40 % en células primarias"). Muchas líneas celulares y células primarias se han transfectado con éxito con el reactivo Effectene; existen protocolos de transfección específicos para cada tipo celular. La citotoxicidad es mínima porque la transfección con el reactivo Effectene puede realizarse en presencia de suero y requiere bajas cantidades de ADN (véase la figura "Cantidad de suero y ADN vs. eficiencia de transfección").

La aplicación de la tecnología del ADN recombinante en campos como el descubrimiento y desarrollo de fármacos ha aumentado la necesidad de transfección de alto rendimiento. La transfección con el reactivo de transfección Effectene requiere bajas cantidades de ADN y una manipulación mínima. Además, no requiere la eliminación de complejos de transfección, lo que lo convierte en un reactivo muy adecuado para el cribado de alto rendimiento.

Principio

El reactivo de transfección Effectene es una innovadora formulación lipídica no liposomal que se utiliza junto con un potenciador especial de condensación de ADN y un tampón optimizado para lograr una alta eficiencia de transfección. El potenciador primero condensa las moléculas de ADN y, posteriormente, el reactivo Effectene las recubre con lípidos catiónicos, lo que proporciona una forma especialmente eficiente de transferir ADN a células eucariotas. Esta característica garantiza una excelente reproducibilidad de la formación de complejos de transfección.

Procedimiento

El procedimiento Effectene consta de dos pasos. Primero, se mezcla el ADN con Enhancer y un tampón que proporciona las condiciones salinas óptimas para una condensación eficiente del ADN. Este paso requiere solo de 2 a 5 minutos. A continuación, se añade el reactivo Effectene y la mezcla se incuba de 5 a 10 minutos para permitir la formación de complejos Effectene-ADN. Los complejos se mezclan con medio de cultivo (que puede contener suero y antibióticos) y se añaden directamente a las células. Las células se incuban hasta su recolección y análisis para determinar la expresión génica (véase el diagrama de flujo "Procedimiento de transfección con Effectene").

Aplicaciones

El reactivo de transfección Effectene es adecuado para la transfección transitoria y estable de una amplia gama de tipos de células.