Qiagen, 301525, Reactivo de transfección TransMessenger (0,5 ml)

Para 60 transfecciones en placas de 6 pocillos o 80 transfecciones en placas de 12 pocillos

Características

- Transfección de alta eficiencia
- Resultados reproducibles garantizados por un estricto control de calidad
- Transfección eficiente de células neuronales primarias

Actuación

El reactivo TransMessenger proporciona un procedimiento rápido y sencillo, con una alta eficiencia de transfección (véase la figura "Reactivo TransMessenger con células HeLa"). Dado que la cantidad de ARN es un factor crítico para el éxito de la transfección, recomendamos optimizar las cantidades de ARN y del reactivo de transfección TransMessenger para cada combinación de tipo celular y ARN (véase la figura "Cantidad de ARN y reactivo TransMessenger vs. eficiencia de transfección"). Para facilitar esto, el reactivo incluye directrices de optimización, junto con puntos de partida para la optimización en diferentes formatos de cultivo celular. El reactivo de transfección TransMessenger es ideal para estudios de células cardíacas funcionales con células cardíacas ventriculares de rata neonatal. Los cardiomiocitos de células cardíacas ventriculares de rata neonatal criopreservadas y disociadas (R-CM-561 [QBMCellScience.com]) muestran una excelente viabilidad, farmacología, morfología y conectividad, así como la actividad contráctil y eléctrica necesaria para su uso en el cribado funcional (véase el vídeo "Control de transfección: Cardiomiocitos funcionales latiendo"). Para evaluar la idoneidad del uso del reactivo de transfección TransMessenger en estudios de células cardíacas funcionales, las células se transfectaron con un vector de expresión de GFP 4 horas después de la siembra y se fijaron 5 días después de la transfección. El uso del reactivo de transfección TransMessenger resultó en una excelente tasa de supervivencia del 60 % después de la transfección, con una eficiencia de transfección del 10-13 %. Todos los cardiomiocitos mostraron latidos después de la transfección (véanse los vídeos "Cardiomiocitos positivos para GPF latiendo después de la transfección" y "Cardiomiocitos funcionales latiendo después de la transfección"), lo que indica células funcionales. Se evaluó el número de cardiomiocitos transfectados frente a los no cardiomiocitos, y los resultados demuestran que se transfectó un elevado número de cardiomiocitos y no cardiomiocitos. También se observaron morfologías equivalentes entre las células transfectadas y las no transfectadas (véase la figura «Estudios de células cardíacas»).

Procedimiento

Todos los componentes del Reactivo TransMessenger se suministran como soluciones listas para usar. Para generar complejos de transfección TransMessenger-ARN, simplemente mezcle el ARN con Enhancer R y Buffer EC-R e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. A continuación, añada el Reactivo TransMessenger e incube durante 5-10 minutos más. Los complejos se mezclan con el medio y se añaden directamente a las células. Tras 3 horas de incubación, se cambia el medio y las células se incuban hasta que estén listas para el análisis. Se obtienen resultados óptimos de transfección utilizando ARN de alta pureza, libre de ADN, proteínas y otros contaminantes. Se recomienda encarecidamente el ARN purificado con RNeasy.

Aplicaciones

- Estudios de células no transfectadas eficientemente con plásmido
- Estudios directos de ADN sobre la función del ARN

La transfección de células con ARN en lugar de ADN ofrece nuevas posibilidades para los experimentos de transfección. Las secuencias de ARN transfectadas se expresan en ausencia de transcripción y de forma independiente del promotor. Además, la expresión de proteínas suele ocurrir antes tras la transfección de ARN que de ADN.

La transfección de ARN con el reactivo de transfección TransMessenger se puede utilizar para: