Qiagen, 301707, reactivo de transfección HiPerFect (4 x 1 ml)

Reactivo de transfección HiPerFect para hasta 1332 transfecciones en placas de 24 pocillos o hasta 5333 transfecciones en placas de 96 pocillos

Características

- Transfección eficiente utilizando bajas concentraciones de ARNi
- Transfección efectiva de células primarias con alta viabilidad celular.
- Transfección efectiva de células en suspensión y macrófagos.
- Protocolos específicos de células en la base de datos de protocolos TransFect
- Transfección eficiente de imitadores o inhibidores de miRNA

Detalles del producto

El reactivo de transfección HiPerFect es una mezcla única de lípidos catiónicos y neutros que permite la captación y liberación eficaz del ARNip en las células, lo que resulta en una alta inhibición génica incluso con bajas concentraciones de ARNip. Además del ARNip, el reactivo de transfección HiPerFect es ideal para la transfección de miméticos o inhibidores de miARN. Los protocolos específicos para cada tipo celular que utilizan el reactivo de transfección HiPerFect están disponibles en la base de datos de protocolos de TransFect.

Actuación

Línea celular: Tipo de célula
K562: Leucemia mieloide crónica humana
Jurkat: célula T humana
D1.1: Célula T humana
RAW 264.7: Macrófago de ratón
J774.A1: Macrófago de ratón
THP-1 diferenciado por PMA: leucemia monocítica aguda humana
MEL: Eritroleucemia murina

Línea celular: Tipo de célula
Raji: célula B humana
U937: Macrófago humano
Molt4: célula T humana
Molt14: célula T humana
HL60: Línea celular promielocítica
E6.1: Célula T humana

Se han probado diversas líneas celulares en suspensión y macrófagos diferenciados e indiferenciados utilizando el reactivo HiPerFect para la transfección de ARNip. Muchas líneas se transfectaron con éxito, con una excelente inhibición de la expresión del gen diana (véase la Tabla 1). La transfección con el reactivo HiPerFect es una alternativa superior a la electroporación para muchos de estos tipos celulares.

Algunas líneas celulares no fueron susceptibles de transfección utilizando el reactivo HiPerFect (ver Tabla 2).

Se logra una inhibición eficiente (>80%) con concentraciones de ARNip en el rango de 1 a 50 nM (véase la figura "El reactivo HiPerFect proporciona una inhibición efectiva de CDC2"). La transfección de ARNip a 1 nM resultó en una inhibición del 86%, mientras que la transfección de ARNip a 5 nM aumentó la eficiencia de inhibición al 96%. Dependiendo del propósito del experimento de ARNi, la concentración óptima de ARNip puede ser 1 nM (riesgo mínimo de efectos no deseados y inhibición eficiente) o 5 nM (mayor eficiencia de inhibición).

Principio

La transfección de ARNip puede provocar efectos no deseados, en los que los ARNip afectan la expresión de genes diana no homólogos o parcialmente homólogos. Estos efectos, que pueden producir resultados engañosos en experimentos de ARNi, se pueden evitar en gran medida utilizando bajas concentraciones de ARNip. Con el reactivo de transfección HiPerFect, se ha observado una transfección y silenciamiento altamente eficientes, en algunos casos con tan solo 10 pM de ARNip. El reactivo de transfección HiPerFect proporciona una transfección de ARNip altamente eficiente en un rango de concentraciones de ARNip, desde bajas hasta altas, lo que permite a los investigadores elegir la concentración de ARNip que desean utilizar. Se puede utilizar para transfectar una amplia gama de tipos celulares, incluyendo HeLa, HeLa S3, HEK 293, NIH/3T3, Huh-7, HepG2, MCF-7, HUVEC y NHLF (véase la figura "Transfección eficiente de NHEK").

investigación de miRNA

Los microARN (miARN) son una clase de pequeñas moléculas endógenas de ARN con características similares a los ARNi. Los miARN intervienen en diversos procesos biológicos, como el desarrollo, la diferenciación y la apoptosis. La transfección de miméticos o inhibidores sintéticos de miARN es una técnica utilizada para dilucidar las dianas y las funciones de determinados miARN. Los miméticos de miARN son miARN sintetizados químicamente que imitan a los miARN naturales tras la transfección en la célula. Los inhibidores de miARN son ARN monocatenarios modificados que inhiben específicamente la función de los miARN. La reducción de la expresión génica tras la transfección de un mimético de miARN, o el aumento de la expresión tras la transfección de un inhibidor de miARN, demuestran que el miARN objetivo participa en la regulación de ese gen. Alternativamente, la función de los miARN en diversas vías puede estudiarse examinando un fenotipo específico tras la transfección de un mimético o inhibidor de miARN. El reactivo de transfección HiPerFect fue desarrollado para una transfección altamente eficiente de células eucariotas con ARNi y es ideal para la transfección de imitadores o inhibidores de miARN.

Procedimiento

El reactivo de transfección HiPerFect se proporciona como una solución lista para usar: solo agregue el reactivo a su ARNi/miARN diluido, mezcle, incube y pipetee los complejos sobre las células. Las transfecciones se pueden realizar en presencia de suero, eliminando la necesidad de eliminar los complejos de las células. Además de los protocolos proporcionados en el Manual del reactivo de transfección HiPerFect, puede encontrar protocolos que se adapten a su tipo de célula y formato de placa/placa utilizando la base de datos de protocolos TransFect. La base de datos elimina las conjeturas de los protocolos de transfección. En lugar de adaptar los protocolos existentes a sus requisitos, la base de datos proporciona exactamente el protocolo necesario, ahorrando tiempo y esfuerzo. Simplemente ingrese el tipo de célula, el ácido nucleico y el formato de placa para recibir un protocolo de transfección QIAGEN para imprimir o descargar en un práctico formato PDF. El uso de la base de datos de protocolos TransFect es gratuito y no es necesario registrarse.

La transfección con el reactivo de transfección HiPerFect puede llevarse a cabo mediante el procedimiento habitual de siembra de células 24 horas antes de la transfección. Como alternativa, se proporcionan protocolos para la transfección inversa en placas de 96 y 384 pocillos (véase el Manual del reactivo de transfección HiPerFect). En estos protocolos, las células se siembran y se transfectan el mismo día. El ARNip/miARN se deposita en los pocillos y, a continuación, se añade el reactivo HiPerFect. Tras la formación del complejo, se añaden las células a los pocillos (véase el diagrama de flujo "Transfección inversa con el reactivo de transfección HiPerFect"). Los protocolos de transfección inversa son rápidos, prácticos y fáciles de automatizar.

Aplicaciones

- Estudios de interferencia de ARN
- Investigación de miRNA
- Estudios sobre la expresión y función genética

El reactivo de transfección HiPerFect permite una transfección de ARNi altamente eficiente, incluso con bajas concentraciones de ARNi, para aplicaciones como: