Qiagen, 30210, Ni-NTA Agarosa (25 ml)

25 ml de resina cargada con níquel (presión máxima: 2,8 psi)

Características

- Purificación en un solo paso desde lisado crudo hasta proteína pura >95 %
- Alta afinidad de unión y alta capacidad.
- Elección de purificación en condiciones nativas o desnaturalizantes
- Matrices precargadas y listas para usar para cualquier escala de purificación
- Protocolos de purificación y ensayo automatizados

Detalles del producto

La agarosa Ni-NTA es una matriz de cromatografía de afinidad para la purificación de proteínas recombinantes con una etiqueta His. Los residuos de histidina en la etiqueta His se unen a las posiciones vacantes en la esfera de coordinación de los iones de níquel inmovilizados con alta especificidad y afinidad. Los lisados ​​celulares clarificados se cargan en las matrices. Las proteínas con etiqueta His se unen y otras proteínas pasan a través de la matriz. Tras el lavado, las proteínas con etiqueta His se eluyen en tampón en condiciones nativas o desnaturalizadas.

Actuación

La agarosa Ni-NTA proporciona Ni-NTA acoplado a un soporte de Sepharosa CL-6B y ofrece una alta capacidad de unión y una mínima unión inespecífica (véase la figura «Purificación en un solo paso en condiciones nativas»). Este material presenta excelentes propiedades de manipulación para la mayoría de las escalas de purificación por lotes y columnas. La agarosa Ni-NTA está disponible por separado o como componente de los kits QIA express, que son kits completos para la expresión y purificación eficientes de proteínas marcadas con His de E. coli.

Principio

El sistema de purificación de proteínas QIA express Ni-NTA se basa en la notable selectividad de la resina patentada Ni-NTA (ácido nitrilotriacético de níquel) para proteínas que contienen una etiqueta de afinidad de seis o más residuos de histidina (consecutivos o alternados): la etiqueta His. Esta tecnología permite la purificación en un solo paso de prácticamente cualquier proteína marcada con His de cualquier sistema de expresión, tanto en condiciones nativas como desnaturalizadas. El NTA, que cuenta con cuatro sitios de quelación para iones de níquel, se une al níquel con mayor fuerza que los sistemas de purificación quelantes de metales, que solo disponen de tres sitios disponibles para la interacción con iones metálicos. El sitio de quelación adicional evita la lixiviación de iones de níquel y da como resultado una mayor capacidad de unión y preparaciones de proteínas con mayor pureza que las obtenidas con otros sistemas de purificación quelantes de metales. El sistema QIA express puede utilizarse para purificar proteínas marcadas con His de cualquier sistema de expresión, incluyendo baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias.

Procedimiento

Desnaturalizantes: Detergentes
6 M Gu·HCl: 2 % Tritón X-100
8 M Urea: 2% Tween 20
1% CHAPS: 20 mM TCEP

La purificación de proteínas marcadas con His consta de 4 etapas: lisis celular, unión, lavado y elución (véase Purificación de proteínas con el sistema de purificación de proteínas Ni-NTA). La purificación de proteínas recombinantes mediante el sistema QIA express no depende de la estructura tridimensional de la proteína ni de la etiqueta 6xHis. Esto permite la purificación de proteínas en un solo paso, ya sea en condiciones nativas o desnaturalizantes, a partir de soluciones diluidas y lisados ​​crudos. Se pueden utilizar desnaturalizantes y detergentes fuertes para una solubilización y purificación eficientes de receptores, proteínas de membrana y proteínas que forman cuerpos de inclusión. Se pueden incluir reactivos que permitan la eliminación eficiente de contaminantes de unión inespecífica en los tampones de lavado (véase la tabla). Las proteínas purificadas se eluyen en condiciones suaves añadiendo 100–250 mM de imidazol como competidor o reduciendo el pH.

Aplicaciones

- Investigaciones estructurales y funcionales
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos de interacción proteína-proteína y proteína-ADN
- Inmunización para producir anticuerpos
- Ampliación de la purificación a escala de producción

Las matrices Ni-NTA proporcionan una purificación confiable en un solo paso de proteínas marcadas con His, adecuadas para cualquier aplicación, incluidas: