Qiagen, 30450, Superflujo Ni-NTA (500 ml)

500 ml de resina cargada con níquel (presión máxima: 140 psi)

Características

- Estabilidad mecánica superior, características de flujo excepcionales y alta capacidad de unión dinámica.
- Purificación conveniente en un solo paso de proteínas marcadas con His 6x
- Permite altos caudales y presiones para aplicaciones FPLC y a escala de producción eficientes.

Detalles del producto

Ni-NTA Superflow es una matriz de cromatografía de afinidad para purificar proteínas recombinantes que llevan una etiqueta His.

Los residuos de histidina en la etiqueta His se unen a las posiciones vacantes en la esfera de coordinación de los iones de níquel inmovilizados con alta especificidad y afinidad. Los lisados ​​celulares aclarados se cargan en las matrices. Las proteínas etiquetadas con His se unen y otras proteínas atraviesan la matriz. Tras el lavado, las proteínas etiquetadas con His se eluyen en tampón en condiciones nativas o desnaturalizadas.

Actuación

Ni-NTA Superflow está compuesto de Ni-NTA acoplado a resina Superflow. Combina una estabilidad mecánica superior con características de flujo excepcionales y una alta capacidad de unión dinámica. La capacidad para proteínas marcadas con 6xHis es de 5 a 10 mg/ml. Esta resina permite la purificación en un solo paso de proteínas marcadas con 6xHis utilizando altos caudales y presiones para aplicaciones eficientes a escala de producción y FPLC.

Principio

El sistema de purificación de proteínas QIAexpress Ni-NTA se basa en la notable selectividad de la resina patentada Ni-NTA (ácido nitrilo-níquel) para proteínas que contienen una etiqueta de afinidad de seis o más residuos de histidina: la etiqueta His. Esta tecnología permite la purificación en un solo paso de prácticamente cualquier proteína marcada con His de cualquier sistema de expresión, en condiciones nativas o desnaturalizadas.

NTA, que cuenta con cuatro sitios de quelación para iones de níquel, se une al níquel con mayor fuerza que los sistemas de purificación quelantes de metales, que solo disponen de tres sitios disponibles para la interacción con iones metálicos. Este sitio de quelación adicional evita la lixiviación de iones de níquel y produce una mayor capacidad de unión y preparaciones de proteínas con mayor pureza que las obtenidas con otros sistemas de purificación quelantes de metales. Ni-NTA Superflow puede utilizarse para purificar proteínas marcadas con His de cualquier sistema de expresión, incluyendo baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias.

Procedimiento

La purificación de proteínas con etiqueta His consta de cuatro etapas: lisis celular, unión, lavado y elución. La purificación de proteínas recombinantes mediante Ni-NTA Superflow no depende de la estructura tridimensional de la proteína ni de la etiqueta 6xHis. Esto permite la purificación de proteínas en un solo paso, tanto en condiciones nativas como desnaturalizadas, a partir de soluciones diluidas y lisados ​​crudos.

Se pueden utilizar desnaturalizantes y detergentes potentes para solubilizar y purificar eficazmente receptores, proteínas de membrana y proteínas que forman cuerpos de inclusión. Se pueden incluir en los tampones de lavado reactivos que permiten la eliminación eficaz de contaminantes de unión inespecífica (véase la tabla).

Las proteínas purificadas se eluyen en condiciones suaves añadiendo 100–250 mM de imidazol como competidor o mediante una reducción del pH.

Aplicaciones

- Investigaciones estructurales y funcionales
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos de interacción proteína-proteína y proteína-ADN
- Inmunización para producir anticuerpos
- Ampliación de la purificación a escala de producción

Las matrices Ni-NTA proporcionan una purificación confiable en un solo paso de proteínas marcadas con His, adecuadas para cualquier aplicación, incluidas:

Para Ni-NTA Superflow, está disponible un Archivo Maestro de Medicamentos (DMF) que contiene características del producto, parámetros cromatográficos, información química y física, especificaciones de control de calidad, información de seguridad y toxicidad y protocolos de purificación estándar para brindar apoyo en cuestiones regulatorias.