Qiagen, 32149, Kit QIAexpress Tipo IV

5 µg cada uno: pQE-30, pQE-31, pQE-32 (N-terminal 6xHis); 10 ml Ni-NTA Agarosa

Características

- Vectores que cubren los tres marcos de lectura
- Kit completo para la expresión y purificación de proteínas marcadas con His
- Expresión de alto nivel de proteínas marcadas con His en el extremo N
- Sistema completo y versátil para purificación en un solo paso y detección sensible

Principio

Elemento: Descripción
1. Elemento promotor/operador optimizado: consta del promotor del fago T5 y dos secuencias operadoras lac, que aumentan la probabilidad de unión del represor lac y garantizan una represión eficiente del potente promotor T5.
2. Sitio de unión ribosomal sintético RBSII: Para una traducción eficiente
3. Secuencia codificante de etiqueta His: 5' o 3' a la región de clonación del polienlazador
4. Codones de terminación de la traducción: en todos los marcos de lectura para una preparación conveniente de construcciones de expresión
5. Dos terminadores transcripcionales fuertes: t 0 del fago lambda y T1 del operón rrnB de E. coli, para evitar la transcripción de lectura continua y garantizar la estabilidad del constructo de expresión.
6. Origen de replicación de ColE1: De pBR322
7. Gen de la beta-lactamasa (bla): Confiere resistencia a la ampicilina.

Los vectores pQE QIA Express combinan un potente promotor del fago T5 (reconocido por la ARN polimerasa de E. coli) con un módulo de represión con doble operador lac para proporcionar una expresión altamente regulada de proteínas recombinantes en E. coli. La síntesis de proteínas se bloquea eficazmente en presencia de altos niveles de represor lac y se mejora la estabilidad de las construcciones citotóxicas. Los vectores pQE (véase la figura y la tabla) permiten la colocación de la etiqueta His en el extremo N o C de la proteína recombinante.

Procedimiento

Los insertos que codifican las proteínas de interés se clonan en construcciones apropiadas y se transforman en una cepa de E. coli adecuada para su expresión. La expresión se induce mediante la adición de IPTG. Las construcciones del kit QIA express Tipo IV pueden transformarse en E. coli, utilizarse como vector lanzadera para la expresión de proteínas recombinantes en células de insecto o transfectarse en células de mamífero.

Aplicaciones

- Purificación de proteínas funcionales y conformacionalmente activas
- Purificación en condiciones desnaturalizantes para la producción de anticuerpos.
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos que involucran interacciones proteína-proteína y proteína-ADN

El sistema de expresión QIA express proporciona una expresión de alto nivel de proteínas adecuadas para muchas aplicaciones, entre ellas: