Qiagen, 32903, conjunto de vectores pQE del extremo C

25 µg de cada uno: pQE-16, pQE-60, pQE-70

Características

- La etiqueta 6xHis C-terminal garantiza que solo se purifique la proteína de longitud completa
- Vector pQE-16 para la expresión de proteínas poco expresadas como fusiones DHFR
- Vector pQE-16 para la expresión de péptidos cortos como fusiones DHFR

Detalles del producto

Este conjunto proporciona 3 vectores (pQE-16, pQE-60 y pQE-70) para la expresión de proteínas marcadas con 6xHis en el extremo C y se recomienda para marcos de lectura abiertos con "sitios de pausa", que pueden causar una terminación prematura. pQE-60 y pQE-70 permiten que el codón de inicio original del fragmento codificante reemplace el ATG en el vector pQE, preservando así el extremo N auténtico de la proteína. Estas dos construcciones se crean introduciendo un sitio de restricción Nco I y Sph I, respectivamente, en el codón ATG del inserto mediante PCR o mutagénesis. pQE-16 permite la expresión de proteínas de fusión DHFR marcadas con 6xHis en el extremo C. La DHFR (dihidrofolato reductasa) mejora la antigenicidad y la estabilidad, y se recomienda para proteínas poco expresadas o péptidos cortos propensos a la proteólisis. Dado que el DHFR en sí muestra poca inmunogenicidad en ratones y ratas, las proteínas de fusión DHFR son ideales para la detección de epítopos.

Principio

Elemento: Descripción
Elemento promotor/operador optimizado: consta del promotor del fago T5 y dos secuencias operadoras lac, que aumentan la probabilidad de unión del represor lac y garantizan una represión eficiente del potente promotor T5.
Sitio de unión ribosomal sintético RBSII: Para una traducción eficiente
Secuencia codificante 6xHis-tag: 5' o 3' a la región de clonación del polienlazador
Codones de terminación traduccionales: en todos los marcos de lectura para una preparación conveniente de construcciones de expresión
Dos terminadores transcripcionales fuertes: t 0 del fago lambda y T1 del operón rrnB de E. coli, para evitar la transcripción de lectura continua y garantizar la estabilidad del constructo de expresión.
Origen de replicación de ColE1: De pBR322
Gen de la betalactamasa (bla): confiere resistencia a la ampicilina

Los vectores pQE QIA express combinan un potente promotor del fago T5 (reconocido por la ARN polimerasa de E. coli) con un módulo de represión con doble operador lac para proporcionar una expresión altamente regulada de proteínas recombinantes en E. coli (véase la figura "Vector pQE QIA express"). La síntesis de proteínas se bloquea eficazmente en presencia de altos niveles de represor lac y se mejora la estabilidad de las construcciones citotóxicas. Los vectores pQE permiten la colocación de la etiqueta 6xHis en el extremo N o C de la proteína recombinante.

Procedimiento

Los insertos que codifican las proteínas de interés se clonan en las construcciones apropiadas (para más información, consulte el Manual del QIAexpressionist) y se transforman en una cepa de E. coli adecuada para su expresión. La expresión se induce mediante la adición de IPTG. Las construcciones del vector pQE-TriSystem pueden transformarse en E. coli, utilizarse como vector lanzadera para la expresión de proteínas recombinantes en células de insecto o transfectarse en células de mamífero.

Aplicaciones

- Purificación de proteínas funcionales y conformacionalmente activas
- Purificación en condiciones desnaturalizantes para la producción de anticuerpos.
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos que involucran interacciones proteína-proteína y proteína-ADN

El sistema de expresión QIA express proporciona una expresión de alto nivel de proteínas adecuadas para muchas aplicaciones, entre las que se incluyen: