Qiagen, 32915, conjunto de vectores pQE N-Terminus

25 µg de cada uno: pQE-9, pQE-30, pQE-31, pQE-32, pQE-40

Características

- Vectores pQE-30 con MCS en los tres marcos de lectura para una clonación rápida
- Vector pQE-40 para proteínas poco expresadas, péptidos cortos
- El vector pQE-40 expresa fusiones DHFR, mejorando la estabilidad y la antigenicidad

Detalles del producto

Este conjunto proporciona 5 vectores (pQE-9, pQE-30, pQE-31, pQE-32 y pQE-40) para la expresión de proteínas marcadas con His en el extremo N-terminal. pQE-30, pQE-31 y pQE-32 proporcionan el sitio de clonación múltiple (MCS) en los tres marcos de lectura, mientras que pQE-9 tiene un sitio de clonación múltiple alternativo, más corto. pQE-40 está diseñado para la expresión de proteínas de fusión DHFR y se recomienda para la expresión de proteínas poco expresadas o péptidos cortos, que a menudo son propensos a la proteólisis, ya que DHFR mejora tanto la estabilidad como la antigenicidad. Dado que DHFR por sí mismo muestra poca inmunogenicidad en ratones y ratas, las proteínas de fusión DHFR son ideales para el cribado de epítopos.

Principio

Elemento: Descripción
Elemento promotor/operador optimizado: consta del promotor del fago T5 y dos secuencias operadoras lac, que aumentan la probabilidad de unión del represor lac y garantizan una represión eficiente del potente promotor T5.
Sitio de unión ribosomal sintético RBSII: Para una traducción eficiente
Secuencia codificante 6xHis-tag: 5' o 3' a la región de clonación del polienlazador
Codones de terminación traduccionales: en todos los marcos de lectura para una preparación conveniente de construcciones de expresión
Dos terminadores transcripcionales fuertes: t 0 del fago lambda y T1 del operón rrnB de E. coli, para evitar la transcripción de lectura continua y garantizar la estabilidad del constructo de expresión.
Origen de replicación de ColE1: De pBR322
Gen de la betalactamasa (bla): confiere resistencia a la ampicilina

Procedimiento

Los insertos que codifican las proteínas de interés se clonan en las construcciones apropiadas (para más información, consulte el Manual del QIAexpressionist) y se transforman en una cepa de E. coli adecuada para su expresión. La expresión se induce mediante la adición de IPTG. Las construcciones del vector pQE-TriSystem pueden transformarse en E. coli, utilizarse como vector lanzadera para la expresión de proteínas recombinantes en células de insecto o transfectarse en células de mamífero.

Aplicaciones

- Purificación de proteínas funcionales y conformacionalmente activas
- Purificación en condiciones desnaturalizantes para la producción de anticuerpos.
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos que involucran interacciones proteína-proteína y proteína-ADN

El sistema de expresión QIA express proporciona una expresión de alto nivel de proteínas adecuadas para muchas aplicaciones, entre las que se incluyen: