Qiagen, 330404, RT 2 Kit de primera hebra (50)

Para cincuenta reacciones de síntesis de ADNc de primera cadena de 20 µl: tampón GE (100 µl), tampón BC3 5x (200 µl), mezcla de transcriptasa inversa RE3 (100 µl), control P2 (50 µl), agua sin nucleasas (1 ml)

Características

- Síntesis rápida y eficiente de ADNc de primera cadena
- Eliminación completa del ADN genómico
- Resultados con tan sólo 25 ng de ARN total por reacción
- ADNc inmediatamente listo para PCR en tiempo real
- Control de ARN externo para monitorizar inhibidores de enzimas

Principio

El kit incluye un procedimiento patentado para eliminar eficazmente el ADN genómico contaminante de las muestras de ARN antes de la transcripción inversa. Hexámeros aleatorios y oligo-dT activan la transcripción inversa de forma imparcial, y una transcriptasa inversa sintetiza el producto de ADNc con un rendimiento y una longitud óptimos. Un control de ARN externo integrado ayuda a supervisar la eficiencia de la transcripción inversa y a detectar inhibidores enzimáticos. Los kits RT 2 First Strand están optimizados para el análisis de la expresión génica mediante PCR en tiempo real mediante matrices de PCR RT 2 Profiler y ensayos de cebadores RT 2 qPCR, y pueden utilizarse con éxito con otros ensayos de análisis de la expresión génica disponibles comercialmente.

Procedimiento

El tampón GE patentado y la muestra se mezclan y se incuban en un termociclador. Tras añadir la enzima y el tampón adicional, la muestra se somete a transcripción inversa utilizando cualquier termociclador. El ADNc transcrito está listo de inmediato para su uso en aplicaciones posteriores. Recomendamos las matrices de PCR RT² Profiler o los ensayos de cebadores RT² qPCR para análisis posteriores.

Los kits RT² First Strand ofrecen resultados con tan solo 25 ng o hasta 5 µg de ARN total por reacción. Sin embargo, la cantidad óptima de material de partida depende de la abundancia relativa de los transcritos de interés. Los transcritos con menor abundancia requieren más ARN; los transcritos con mayor abundancia requieren menos ARN. Una mayor cantidad de ARN de entrada produce un mayor número de llamadas positivas (es decir, detección de expresión génica) en el rango dinámico lineal del método.