Qiagen, 333314, Kit de ensayo cuantitativo de biblioteca QIAseq

1 tubo de mezcla de cebadores (500 µl), 1 botella de tampón de dilución (30 ml), 1 tubo de estándar de ADN (100 µl) y 5 tubos GeneRead qPCR SYBR Green (1,35 ml) para la cuantificación de la biblioteca de muestras antes de NGS

Características

- Estándar de ADN predispensado, listo para usar y diluido secuencialmente (formato matriz)
- Cálculo automático de la concentración de la biblioteca
- Protocolo simple, alta sensibilidad y amplio rango dinámico.
- Compatibilidad con las plataformas Illumina y Ion Torrent/Proton NGS
- Compatibilidad con la mayoría de los instrumentos qPCR

Detalles del producto

El sistema QIAseq Library Quant ofrece una solución sencilla y lista para usar para cuantificar bibliotecas de NGS, lo que permite obtener resultados consistentes en cada análisis de NGS. El sistema QIAseq Library Quant utiliza PCR en tiempo real para cuantificar específicamente moléculas de ADN con adaptadores de secuenciación en ambos extremos, lo que garantiza una densidad de clústeres óptima o una proporción óptima entre plantillas y microesferas.

Tenga en cuenta: GeneRead Library Quant Array (número de producto 180611) y GeneRead Library Quant Kit (número de producto 180612) se dejarán de fabricar a finales de 2016. Utilice en su lugar QIAseq Library Quant Assay Kit (número de producto 333314).

¿Necesita un presupuesto para su proyecto de investigación o desea hablar sobre él con nuestro equipo de especialistas? Contáctenos.

Actuación

La sensibilidad y el rango dinámico del sistema QIAseq Library Quant se compararon con el kit de ADN de alta sensibilidad de Agilent, utilizando dos bibliotecas NGS con diferentes concentraciones. La primera biblioteca fue cuantificable con ambos sistemas, pero la baja concentración de la segunda biblioteca estuvo por debajo del límite de detección del BioAnalyzer 2100 de Agilent. Por el contrario, el QIAseq Library Quant Array fue capaz de cuantificar ambas bibliotecas (véase la figura). El sistema QIAseq Library Quant permite la cuantificación de bibliotecas con concentraciones inferiores al límite de detección de los métodos convencionales.

Procedimiento

El flujo de trabajo del formato de matriz (véase la figura: Flujo de trabajo de matriz cuantitativa de bibliotecas QIAseq) comienza con dos diluciones décuples de la biblioteca de muestras para garantizar que su concentración se encuentre dentro del rango de los estándares diluidos en serie. Las muestras se mezclan con QIAseq qPCR SYBR Green Mastermix y se alicuotan por triplicado técnico en la placa de matriz. Se realiza la PCR y los valores de CT sin procesar se exportan al archivo Excel de análisis de datos proporcionado para el cálculo automático de la concentración de la biblioteca (plataforma Illumina) o el factor de dilución de la plantilla (plataforma Ion Torrent/Proton).

El flujo de trabajo en formato de tubo es similar al del formato de matriz, con algunas pequeñas diferencias. El procedimiento comienza con la preparación de cinco diluciones décuples secuenciales del estándar de ADN y dos diluciones décuples de la biblioteca de muestras. Esto garantiza que la concentración de la biblioteca se encuentre dentro del rango de las diluciones del estándar. A continuación, los estándares de ADN diluidos y las bibliotecas de muestras se mezclan con el ensayo de PCR proporcionado y la mezcla maestra QIAseq qPCR SYBR Green adecuada. Se realiza la PCR y los valores de CT se exportan al archivo Excel de análisis de datos proporcionado para el cálculo automático de la concentración de la biblioteca (plataforma Illumina) o el factor de dilución de la plantilla (plataforma Ion Torrent/Proton).