Qiagen, 339125, control inhibidor de miRNA miRCURY LNA (1 nmol)

Control inhibidor de miRNA miRCURY LNA de 1 nmol con enlaces de nucleótidos fosfodiéster normales y opción de etiqueta FAM, proporcionado en formato de tubo

Características

- Inhibidores normalizados de T m con potencia inigualable contra cualquier miRNA, independientemente del contenido de GC
- Inhibidores de potencia tan potentes que funcionan mediante captación sin ayuda y sin necesidad de reactivos de transfección.
- Especificidad superior y estabilidad biológica para una actividad antisentido duradera
- Disponible en cantidades de 1 nmol, 5 nmol y 15 nmol
- Etiquetas fluorescentes para un cómodo control de la eficiencia de la transfección.

Detalles del producto

Los inhibidores de miRNA miRCURY LNA y los inhibidores de potencia son excepcionalmente potentes, lo que permite la evaluación de fenotipos celulares en estudios de pérdida de función de miRNA, incluso en líneas celulares difíciles de transfectar. Los controles inhibidores de miRNA miRCURY LNA y los controles inhibidores de potencia son similares en longitud de secuencia y diseño de LNA a los inhibidores y no tienen homología con ninguna secuencia de miRNA o ARNm conocida de ratón, rata o humano.

Actuación

Los inhibidores de miARN miRCURY LNA normalizados en Tm presentan una potencia inigualable contra todos los miARN, independientemente de su contenido de GC (véase la figura: Ejemplos de silenciamiento de miARN con inhibidores de miARN miRCURY LNA). Los inhibidores Power son tan potentes que pueden añadirse directamente a cultivos celulares sin necesidad de reactivos de transfección (véase la figura: Silenciamiento de miARN mediante la captación directa (gimnosis) de inhibidores Power). Además, la simple administración sistémica de inhibidores de miARN modificados con LNA de grado in vivo permite el análisis de la función de los miARN en modelos animales.

Principio

- Inhibidores de miRNA miRCURY LNA: tienen enlaces de nucleótidos fosfodiéster normales, que son altamente efectivos en la mayoría de los experimentos estándar.
- Inhibidores de potencia de miRNA miRCURY LNA: tienen cadenas principales totalmente modificadas con fosforotioato (PS), que son útiles para aplicaciones desafiantes, como líneas celulares difíciles de transfectar.

- Control negativo A: sin coincidencias de >70% de homología con ninguna secuencia en ningún organismo en las bases de datos NCBI y miRBase.
- Control negativo B: sin coincidencias de >70% de homología con ninguna secuencia humana, de ratón o de rata en las bases de datos NCBI y miRBase; no se recomienda su uso en plantas

Los inhibidores de miARN miRCURY LNA son oligonucleótidos antisentido con una secuencia perfectamente complementaria a sus dianas. Al introducirse en las células, secuestran el miARN diana en heterodúplex altamente estables, impidiendo eficazmente que el miARN se hibride con sus compañeros de interacción celular normales. La potencia de los inhibidores antisentido de miARN está determinada por su afinidad por su diana y su estabilidad biológica. La afinidad de los inhibidores normales con la química de nucleótidos convencional depende del contenido de GC del miARN diana. Dado que el contenido de GC de los miARN puede variar entre el 5 % y el 95 %, la potencia de estos inhibidores varía considerablemente según la secuencia del miARN, siendo prácticamente nula con los miARN ricos en AT.

Diseño

Hemos aprovechado las propiedades de alta afinidad de la química de LNA para crear inhibidores de miARN miRCURY LNA normalizados por Tm e inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA. La variación del número y la posición de los nucleótidos de LNA en estos inhibidores de mixmer de ADN/LNA y la selección cuidadosa de las secuencias diana normalizan las temperaturas de fusión de los oligonucleótidos dentro de un margen estrecho en torno a una temperatura óptima alta determinada empíricamente (véase la figura "Características generales del diseño del inhibidor de miARN de tercera generación"). Estas características de diseño garantizan que los inhibidores de miARN miRCURY LNA tengan la misma alta eficacia, independientemente del contenido de GC de sus dianas de miARN. Ofrecemos los siguientes dos tipos de inhibidores de miARN:

Silenciamiento de miRNA sin reactivos de transfección

La combinación de modificaciones de LNA y fosforotioato mejora drásticamente la estabilidad de los inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA frente a la degradación enzimática, por lo que su eficacia es significativamente mayor que la de los inhibidores convencionales (véase la figura "Potencia mejorada de los inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA"). De hecho, son tan estables y potentes que pueden añadirse directamente al medio de cultivo con suero sin necesidad de reactivos de transfección, lo que proporciona una inhibición eficiente de miARN mediante la administración directa sin asistencia, también conocida como gimnosis. Esto permite evaluar las consecuencias del silenciamiento de miARN sin preocuparse por los efectos secundarios de los reactivos de transfección. La administración sin asistencia requiere concentraciones de inhibidor significativamente mayores, y la cinética de captación suele ser más lenta que con reactivos de transfección (véase la figura "Silenciamiento de miARN mediante captación directa (gimnosis) de los inhibidores de potencia"). Además, la capacidad de captar oligonucleótidos directamente del medio de cultivo varía significativamente entre las líneas celulares. Los inhibidores de potencia son especialmente útiles en aplicaciones complejas, como aquellas que involucran células difíciles de transfectar, dianas de miRNA altamente expresadas, experimentos de larga duración y cuando los procedimientos de transfección habituales resultan en consecuencias fenotípicas inaceptables. No se recomienda el uso de los inhibidores de potencia de miRNA miRCURY LNA con células o líneas celulares derivadas del músculo o del sistema nervioso central (SNC). Se sabe que estos tipos celulares son particularmente sensibles a los oligonucleótidos modificados con fosforotioato, que pueden producir fenotipos engañosos no relacionados con la actividad antisentido.

Toxicidad mínima y efectos no deseados

La alta potencia de los inhibidores de miRNA miRCURY LNA y los inhibidores de potencia de miRNA miRCURY LNA permite su uso en bajas concentraciones, lo que minimiza el riesgo de efectos secundarios no deseados no relacionados con la actividad antisentido. Los dúplex de ADN/ARN son un sustrato para la ARNasa H, que degrada la cadena de ARN, y utilizamos esta actividad catalítica en nuestros GapmeRs para el silenciamiento de ARN. Para garantizar que nuestros inhibidores de miRNA no degraden el ARNm y los ARN largos no codificantes que contienen una secuencia complementaria, hemos posicionado los nucleótidos de LNA de tal manera que nunca se distancien más que unas pocas bases. El LNA inhibe eficazmente la actividad de la ARNasa H, asegurando que los dúplex de inhibidor de LNA/ARN no sean reconocidos como sustratos por la ARNasa H. Como resultado, se minimizan los efectos fuera del objetivo sobre la estabilidad del ARNm y el ARNlnc. Finalmente, los ribosomas poseen una potente actividad helicasa que puede eliminar eficazmente incluso oligonucleótidos cortos de alta afinidad y potenciados con LNA. Por lo tanto, nuestros inhibidores también tienen efectos mínimos en la traducción de ARNm con secuencias complementarias en el marco de lectura abierto.

Cobertura

Los inhibidores de miARN miRCURY LNA prediseñados y los inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA se han diseñado para todos los miARN conocidos de humanos, ratones y ratas. Dado que muchos miARN se conservan filogenéticamente, este conjunto de inhibidores cubre una gran proporción de miARN de vertebrados e invertebrados. Estos inhibidores también están disponibles con marcadores de fluoresceína (6-FAM). Todos los inhibidores de miARN se desalinizan y se suministran secos en tubos en cantidades de 1 nmol, 5 nmol y 15 nmol.

Controles negativos prediseñados

Actualmente ofrecemos cuatro controles negativos prediseñados: dos para inhibidores de miARN miRCURY LNA y dos para inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA. Los controles de inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA tienen cadenas principales modificadas con fosforotioato para que coincidan con los inhibidores de potencia de miARN miRCURY LNA. Para cada categoría de inhibidor, ofrecemos los dos controles siguientes: