Qiagen, 339317, ensayo de PCR personalizado de miRCURY LNA miRNA

Contiene cebadores directos e inversos para 200 reacciones de qPCR en tiempo real basadas en SYBR® Green, 166 reacciones de PCR digital basadas en EvaGreen para Nanoplate 8.5k o 50 reacciones de PCR digital basadas en EvaGreen para Nanoplate 26k

Características

- Diseñe fácilmente un ensayo personalizado para su miRNA específico de interés
- Detecta señales verdaderas en un rango de detección muy bajo, hasta 1 copia de miRNA
- Flujo de trabajo rápido y sencillo que tarda 2 horas
- Diseño de ensayos de miRNA para cualquier miRNA, isoforma o variante de miRNA nueva

Detalles del producto

Los ensayos PCR de sonda personalizada miRCURY LNA miRNA son conjuntos de cebadores y sondas de PCR de miRNA diseñados a medida que permiten una cuantificación de miRNA extremadamente sensible y específica con el sistema PCR de sonda miRCURY LNA miRNA. Tanto el cebador de amplificación por PCR directa como la sonda marcada con FAM y extintor oscuro son específicos para miRNA y están optimizados con tecnología LNA, lo que optimiza el rendimiento del ensayo. Los ensayos se crean fácilmente en línea utilizando el mismo algoritmo robusto y optimizado que nuestros ensayos prediseñados. Por lo tanto, los ensayos personalizados y prediseñados se pueden combinar y su funcionamiento está garantizado.

¿Necesita un presupuesto para su proyecto de investigación o desea hablar sobre él con nuestro equipo de especialistas? ¡Contáctenos!

Actuación

Detección de alta sensibilidad de señales reales

La excepcional sensibilidad de los ensayos de PCR con sonda personalizada miRCURY LNA miRNA se logra combinando la transcripción inversa universal con cebadores y sondas específicos para miRNA, potenciados con LNA y normalizados por Tm. Esta combinación permite una cuantificación precisa y fiable de miRNA individuales desde tan solo 1 pg de ARN total o hasta una molécula sin preamplificación (véase Cuantificación precisa incluso con bajo material de partida y Eficiencia excepcional en un amplio rango dinámico). La sensibilidad y la rapidez del flujo de trabajo hacen que el sistema sea especialmente adecuado para muestras de suero o plasma, y ​​las enzimas QuantiNova garantizan resultados altamente reproducibles entre réplicas técnicas y biológicas a la primera, ahorrando material de muestra y tiempo.

En comparación con otros sistemas de PCR basados ​​en sondas de miRNA que dependen únicamente de la sonda para generar especificidad, el cebador y la sonda mejorados con LNA de los ensayos de sonda personalizada miRCURY LNA miRNA son específicos para miRNA y lo suficientemente cortos como para evitar la superposición al unirse a la diana (consulte el sistema de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA de un vistazo), lo que mejora la sensibilidad, la especificidad y la eficiencia del ensayo. Combinado con una excelente relación señal-ruido (consulte Detección precisa incluso con un alto nivel de ARN de fondo), esta característica única permite discriminar miRNA estrechamente relacionados con diferencias de secuencia de tan solo un nucleótido (consulte Poder discriminatorio hasta una sola diferencia de nucleótido).

Validado y optimizado

Los diseños de ensayos (cebador y sonda) para nuevos miRNA se basan en un algoritmo de diseño creado por expertos en LNA y ensayos. Este completo algoritmo evalúa y optimiza 60 parámetros validados in silico según criterios de rendimiento muy estrictos para garantizar un diseño con la máxima sensibilidad y especificidad. El resultado son ensayos capaces de detectar hasta una copia de miRNA.

Rápido y fácil

El protocolo, fácil de seguir y de 2 horas, ahorra tiempo y trabajo. Al utilizar una transcripción universal y protocolos optimizados de RT-PCR, el procedimiento se simplifica considerablemente en comparación con otras soluciones. Además, el ADNc generado en el paso de RT puede utilizarse en todo el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA Probe, lo que permite una transición fluida de paneles a ensayos según las necesidades de su investigación, ahorrando material de muestra y tiempo. El número de pasos de pipeteo se reduce al mínimo, lo que también minimiza la variación técnica. La robustez del ensayo permite la configuración a temperatura ambiente y análisis diferidos para una mayor flexibilidad y un uso automatizado. Este flujo de trabajo simplificado, junto con la fabricación de ensayos conforme a las normas ISO, permite lograr una reproducibilidad extremadamente alta, tanto diaria como entre centros.

Principio

- Optimización de las temperaturas de fusión variando la distribución de LNA de los cebadores y la sonda para garantizar una alta eficiencia y especificidad de amplificación.
- Cálculos y ajustes de puntuaciones de autohibridación e hibridación cruzada para reacciones de PCR eficientes.
- Ajustes para evitar la posible formación de dímeros-cebadores en la reacción de PCR.
- Posicionamiento inteligente de bases LNA en los cebadores y la sonda basado en nuestro amplio conocimiento del diseño de oligonucleótidos LNA.
miRBase busca para identificar posibles miRNA con alta similitud de secuencia dentro de la misma especie. Esto garantiza que los conjuntos de cebadores y sondas sean altamente específicos para el ARN pequeño para el que fueron diseñados.

El proceso de diseño

La herramienta de diseño de ensayos de PCR con sonda personalizada miRCURY LNA miRNA permite diseñar fácilmente conjuntos de cebadores y sondas de PCR mejorados con LNA, altamente sensibles y específicos, para cualquier miRNA no disponible en ensayos prediseñados. El algoritmo avanzado evalúa aproximadamente 3000 diseños de pares de cebadores y sondas, basándose en más de 60 criterios diferentes, para encontrar los cebadores y sondas de LNA óptimos para su miRNA en cuestión de minutos. La herramienta está diseñada para miRNA, pero también puede utilizarse para otros ARN pequeños de entre 14 y 27 nucleótidos de longitud.

Los criterios de diseño incluyen:

Un sistema único para la cuantificación de miRNA

El sistema de PCR con sonda miRCURY LNA miRNA permite la cuantificación y el perfilado de miRNA sensibles y específicos mediante PCR en tiempo real. La detección se basa en una sonda de hidrólisis marcada con FAM y un extintor oscuro. El sistema abarca todos los pasos de la conversión de miRNA a ADNc y la posterior detección de miRNA mediante qPCR. Los ensayos de PCR con sonda personalizada miRCURY LNA miRNA se han validado con la mezcla maestra de sondas QuantiNova; el uso de otros reactivos para qPCR afectará los resultados.

Kit de adición de ARN para RT

El kit de adición de ARN permite el control de calidad del aislamiento de ARN, la síntesis de ADNc y la amplificación por PCR de los experimentos de PCR con la sonda miARN miRCURY LNA, lo que permite identificar muestras de baja calidad en las primeras etapas del proceso y ahorrar tiempo y reactivos. El kit incluye la mezcla de plantillas de adición de ARN UniSp2, UniSp4 y UniSp5 y la plantilla de adición de ARN cel-miR-39-3p.

Kit de radioterapia LNA miRCURY

Un kit universal de transcripción inversa para dos sistemas de detección. El kit miRCURY LNA RT se utiliza tanto para el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA, que utiliza SYBR Green para la detección, como para el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA con sonda. El kit incluye dos tampones de reacción específicos para cada sistema y todos los reactivos necesarios para realizar la poliadenilación y la transcripción inversa de miARN de forma rápida y sencilla en un solo paso.

Kit de PCR de sonda miRCURY

Optimizado y específico para el sistema de PCR de sonda miARN miRCURY LNA, este kit contiene la mezcla maestra de sonda QuantiNova de alto rendimiento y el cebador inverso universal de sonda miRCURY. Combinado con un ensayo de sonda miARN miRCURY LNA o un panel de PCR de sonda miARN miRCURY LNA, la química permite la detección de miARN mediante PCR cuantitativa en tiempo real.

Ensayos de sonda miARN miRCURY LNA

Estos ensayos de cebadores y sondas utilizan sondas de hidrólisis específicas de miARN y cebadores directos específicos de miARN diseñados para detectar miARN maduros utilizando la información de secuencia más actualizada de miRBase 22. El cebador inverso universal de sonda miRCURY está incluido en el kit de PCR de sonda miRCURY.

Paneles de PCR de sonda miARN LNA miRCURY

Placas de panel de PCR prediseñadas, listas para usar y de un solo uso para perfilar rápidamente miRNA maduros centrándose en el miRNoma, vías específicas, ciertos tipos de muestras como suero/plasma o en un panel personalizado diseñado por el usuario.

Centro de análisis de datos GeneGlobe

Esta herramienta de análisis gratuita basada en la web lo guía paso a paso a través de un asistente sencillo a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras listas para publicar.

Procedimiento

El primer paso, la reacción de transcripción inversa, es una reacción fácil de realizar en un solo tubo. El ARN total, incluyendo el miARN, se utiliza como material de partida y el ADNc resultante se utiliza en la amplificación por PCR en tiempo real con cebadores potenciados con LNA y una sonda de hidrólisis para detectar los miARN maduros. Esto permite una cuantificación y perfilación sencillas de miARN, accesibles para cualquier laboratorio con un ciclador de PCR en tiempo real.

Aplicaciones

- Detección, perfilado y cuantificación de la expresión de miRNA
- Desarrollo de biomarcadores de miRNA: detección e identificación
- Regulación y análisis de vías de miRNA
- Detección de miRNA en tipos de muestras complejos y muestras con niveles bajos de expresión de miRNA (por ejemplo, exosomas, suero, plasma, orina, secciones FFPE)
- detección de snoRNA
- Validación de la secuenciación de miRNA

Los ensayos de sonda miRCURY LNA miRNA personalizados se utilizan como parte del sistema de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA para: