Qiagen, 339322, paneles de PCR miRCURY LNA miRNA miRNome

Paneles de PCR miRCURY LNA miRNA para la elaboración de perfiles de miRNome basados ​​en PCR, disponibles en formato de 384 pocillos; para detección basada en SYBR® Green

Características

- La sensibilidad inigualable permite perfilar 752 miRNA utilizando solo 40 ng de ARN total
- Disponible para miRNA humanos, de ratón y de rata.
- Rápido y fácil de usar sin necesidad de preamplificación.
- Discriminación fiable de miRNA estrechamente relacionados y miRNA maduros y precursores

Detalles del producto

Los paneles de PCR miRCURY LNA miRNA miRNome permiten la caracterización de la expresión de miRNA con una sensibilidad y especificidad excepcionales mediante la tecnología LNA y el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA. Estos conjuntos de cebadores de PCR prediseñados se prealicuota en placas de PCR de 384 pocillos y están listos para usar. Disponibles para miRNA humanos, de ratón y de rata, los paneles de PCR miRCURY LNA miRNA miRNome permiten caracterizar hasta 752 miRNA humanos o de roedores utilizando solo 40 ng de ARN total, sin necesidad de preamplificación.

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Actuación

Máximo rendimiento en especificidad

La plataforma de PCR de miARN miRCURY LNA es la única plataforma de cuantificación de miARN con especificidad absoluta (véase el estudio miRQC publicado en Nature Methods) y superó a otra plataforma de qPCR de miARN basada en sondas en pruebas de especificidad (véase la figura "Prueba de especificidad junto con el sistema de qPCR de miARN basado en sondas de la competencia"). Esto elimina los falsos positivos y garantiza señales de miARN robustas y fiables.

Resultados rápidos y reproducibles a partir de cantidades mínimas de muestra

Los paneles PCR miRCURY LNA miRNA miRNome permiten la elaboración de perfiles de 752 miRNA a partir de solo 40 ng de ARN total, por lo que puede realizar perfiles de expresión de miRNA de alta calidad en muestras que contienen muy poco ARN total, como secciones FFPE y suero/plasma (consulte las figuras Perfil de expresión de 730 miRNA utilizando 40 ng de ARN total de secciones FFPE tumorales y normales y Perfil de expresión de 368 miRNA utilizando ARN total de 35 μl de suero). El protocolo fácil de seguir de 3 horas le ahorra tiempo y esfuerzo en el laboratorio. Simplemente diluya el ADNc sintetizado, combínelo con la mezcla maestra miRCURY LNA SYBR Green y alícuota en la placa PCR de 384 pocillos, que luego está lista para ejecutarse en su instrumento de PCR en tiempo real. El número de pasos de pipeteo se reduce al mínimo, lo que reduce la variación técnica. Como resultado, se puede lograr una reproducibilidad extremadamente alta día a día e incluso entre sitios (véanse las figuras: Excelente reproducibilidad día a día y Excelente correlación entre sitios). Se logra una alta reproducibilidad incluso al perfilar muestras complejas, como el ARN purificado del suero (véase la figura: Excelente reproducibilidad entre reacciones de RT en el ARN total del suero).

Principio

Características

Los paneles de PCR miRCURY LNA miRNA miRNome permiten la elaboración de perfiles de expresión con una sensibilidad excepcional y un alto rendimiento a partir de cantidades mínimas de material de partida. La combinación de una reacción universal de síntesis de ADNc y paneles de PCR listos para usar proporciona una elaboración de perfiles de miARN rápida y sencilla. Los paneles se suministran en placas de 384 pocillos que contienen cebadores desecados para una reacción por pocillo y simplemente requieren la adición de ADNc y la mezcla maestra miRCURY LNA SYBR Green antes de la amplificación por PCR en tiempo real. Los cebadores de PCR específicos para miARN, mejorados con LNA, ofrecen una sensibilidad excepcional y un fondo extremadamente bajo, lo que permite una cuantificación precisa de niveles muy bajos de miARN. Además, su alta especificidad permite la discriminación entre secuencias de miARN estrechamente relacionadas, con un protocolo rápido y sencillo que proporciona resultados en tan solo 3 horas.

Cobertura

Se encuentran disponibles dos paneles con 752 miARN humanos y dos paneles con 752 miARN de ratón y rata. El panel I, para humanos y ratones/ratas, contiene conjuntos de cebadores de miARN de alta prioridad. Estos miARN suelen tener una mayor expresión, mayor probabilidad de expresarse diferencialmente en enfermedades o ser citados con mayor frecuencia en la literatura. El panel II contiene conjuntos de cebadores para los miARN más importantes no disponibles en el panel I. Para ver la lista de conjuntos de cebadores de cada panel, descargue los archivos de diseño de placa. Los paneles de PCR de miRNome también incluyen seis posibles conjuntos de cebadores de genes de referencia: tres genes de referencia de ARN pequeño (U6, SNORD38B y SNORD49A para humanos y ARNpn U6, RNU5G y RNU1A para ratones y ratas) y tres genes de referencia de miARN (miR-103-3p, miR-191-5p y hsa-miR-423-5p o mmu-miR-423-3p), todos ellos presentes en el Panel I. El Panel I también contiene ensayos de qPCR para los cinco ARN sintéticos del kit de adición de ARN (cel-miR-39-3p, UniSp2, UniSp4, UniSp5 y UniSp6), que pueden utilizarse para monitorizar la síntesis de ADNc o la purificación de ARN. Finalmente, cada panel contiene un calibrador interplaca por triplicado y un control negativo vacío.

Actualización de la versión

Los paneles actualizados de PCR miRCURY LNA miRNA miRNome incluyen 54 ensayos actualizados en el Panel I y 33 ensayos actualizados en el Panel II. Los ensayos se dirigen a los mismos miRNA que los paneles v3. Además, los dos conjuntos de cebadores de adición, UniSp5 y UniSp6, se han actualizado para mejorar su rendimiento. Sus respectivas plantillas diana serán las mismas.