Qiagen, 339340, Kit de RT miRCURY LNA

Para 8–64 reacciones de síntesis de ADNc: 5x tampón de reacción RT SYBR Green, 5x tampón de reacción de sonda RT, 10x mezcla de enzimas RT, UniSp6, plantilla de adición de ARN, agua sin ARNasa

Características

- Optimizado para ambos métodos de detección de ensayos y paneles de PCR de miRCURY LNA miRNA
- Síntesis de primera cadena rápida, fácil y confiable
- Incluye plantilla de ARN para monitorizar el rendimiento.

Detalles del producto

El kit miRCURY LNA RT permite la poliadenilación y la transcripción inversa de miRNA de forma rápida y sencilla en un solo paso. El uso de una reacción de RT universal como plantilla para las posteriores amplificaciones por PCR simplifica considerablemente el procedimiento en comparación con los sistemas que requieren la síntesis de la primera cadena específica de miRNA, lo que aumenta la comodidad y ahorra tiempo. El kit ha sido diseñado para su uso con los dos sistemas de PCR miRCURY LNA miRNA, utilizando SYBR Green o una sonda de hidrólisis mejorada con LNA como método de detección. El kit contiene dos tubos de tampón de reacción independientes para el método de detección por PCR correspondiente.

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Actuación

La transcripción inversa simplificada ahorra tiempo y recursos

El uso de una reacción de transcripción inversa universal por muestra de ARN ahorra reactivos y muestras valiosas, además de tiempo. El kit miRCURY LNA RT se utiliza en la síntesis de ADNc de primera cadena tanto para sistemas de PCR miRCURY LNA miRNA, empleando SYBR Green para la detección (véase el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA de un vistazo) como para una sonda de hidrólisis específica para miRNA mejorada con LNA (véase el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA Probe de un vistazo). El kit incluye un tampón de reacción específico para cada sistema. Los ensayos y paneles de miRNA son específicos para cada sistema.

Sensibilidad inigualable

La transcripción inversa universal, combinada con componentes de PCR mejorados con LNA y normalizados con Tm, permite una cuantificación precisa y fiable de miARN individuales a partir de tan solo 1 pg de ARN total (véase la figura "Cuantificación precisa a partir de 1 pg de ARN total como material de partida"). Gracias a su excepcional sensibilidad y un fondo extremadamente bajo, es posible cuantificar con precisión niveles muy bajos de miARN sin preamplificación. Esto hace que el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA y el sistema de PCR de sonda de miARN miRCURY LNA sean adecuados para todo tipo de muestras, especialmente aquellas con bajo contenido de ARN, como suero, plasma y otros biofluidos.

Rápido y fácil

El kit miRCURY LNA RT es el primer paso para los sistemas de PCR miRCURY LNA miRNA, que utilizan SYBR Green o una sonda de hidrólisis para la detección. Su protocolo, fácil de seguir y de 2 horas, ahorra tiempo y esfuerzo. Al utilizar una transcripción inversa universal y protocolos de RT-PCR optimizados, el procedimiento se simplifica considerablemente en comparación con otras soluciones. Además, el ADNc generado en el paso de RT puede utilizarse en el sistema elegido, lo que permite una transición fluida de paneles a ensayos según las necesidades de su investigación, ahorrando material de muestra y tiempo. El número de pasos de pipeteo se reduce al mínimo, lo que también minimiza la variación técnica. Este flujo de trabajo simplificado, junto con la fabricación de ensayos conforme a las normas ISO, permite lograr una reproducibilidad extremadamente alta día a día y entre centros.

Principio

- Kit de RT LNA miRCURY
- Kit de adición de ARN
- Kit de PCR miRCURY LNA SYBR Green
- Ensayos de PCR de miARN LNA miRCURY (predefinidos, personalizados)
- Paneles de PCR de miRNA LNA miRCURY (miRNome, Focus, Custom)

- Kit de RT LNA miRCURY
- Kit de adición de ARN
- Kit de PCR de sonda LNA miRCURY
- Ensayos de sonda miRCURY LNA miRNA (predefinidos, personalizados)
Paneles de sondas miRCURY LNA miRNA (miRNome, Focus, Custom)

Un kit miRCURY LNA RT para dos sistemas de detección

El kit miRCURY LNA RT se utiliza para ambos sistemas de PCR miRCURY LNA miRNA, ya sea con SYBR Green o con métodos de detección de sonda de hidrólisis. Este kit incluye dos tampones de reacción específicos del sistema y todos los reactivos necesarios para realizar la poliadenilación de miRNA y la transcripción inversa de forma rápida y cómoda en un solo paso de reacción. El uso de una única reacción de RT universal como plantilla para las posteriores amplificaciones por PCR simplifica enormemente el procedimiento en comparación con los sistemas que requieren la síntesis de primera cadena específica de miRNA (véase la figura "El beneficio de un paso de transcripción inversa universal"). Además, el ADNc generado en el paso de RT se puede utilizar en todo el sistema elegido, lo que permite una transición fluida de paneles a ensayos según las necesidades de su investigación y ahorra material de muestra y tiempo. El aditivo de ARN UniSp6 incluido en el kit se puede utilizar con el ensayo de control (ensayo de PCR UniSp6 miRCURY LNA miRNA) como control positivo de transcripción inversa o como calibrador interplaca en nuestros paneles de PCR de miRNA.

Sistema de PCR de miRNA miRCURY LNA (SYBR Green)

La arquitectura de este sistema consta de detección SYBR Green con dos cebadores mejorados con LNA y específicos de miRNA para un rendimiento inigualable (consulte el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA de un vistazo).

Sistema de PCR de sonda miARN miRCURY LNA

Una sonda de hidrólisis única, mejorada con LNA y específica de miRNA se combina con un cebador directo mejorado con LNA y específico de miRNA para obtener señales verdaderas altamente específicas y sensibles (consulte el sistema de PCR de sonda de miRNA LNA miRCURY de un vistazo).

Procedimiento

Las reacciones de transcripción inversa son fáciles de realizar en un solo tubo. Se utiliza ARN total, incluido el miARN, como material de partida. El procedimiento implica incubar la reacción a 40-42 °C durante una hora, seguida de una etapa de inactivación mediante una breve incubación a 95 °C.

Aplicaciones

- Detección, perfilado y cuantificación de la expresión de miRNA
- Desarrollo de biomarcadores de miRNA: detección e identificación
- Regulación y análisis de vías de miRNA
- Detección de miRNA en tipos de muestras complejos y muestras con niveles bajos de expresión de miRNA
- detección de snoRNA
- Validación de la secuenciación de miRNA

El kit miRCURY LNA RT se utiliza como parte de los sistemas miRCURY LNA miRNA PCR y Probe PCR para: