Qiagen, 339350, ensayo de PCR de sonda de miRNA miRCURY LNA (200)

Ensayos premezclados completos que contienen cebador directo y sonda específicos de la diana, mejorados con LNA. Para 200 reacciones.

Características

- Cebador de PCR directo y sonda de hidrólisis específicos de miRNA mejorados con LNA
- Detecta señales verdaderas en un rango de detección muy bajo, hasta 1 copia de miRNA
- Flujo de trabajo rápido y sencillo de dos pasos que tarda 2 horas
- Alto nivel de robustez y reproducibilidad para obtener resultados confiables

Detalles del producto

Los ensayos de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA son conjuntos de cebadores y sondas para PCR de miRNA que permiten una cuantificación de miRNA extremadamente sensible y específica con el sistema de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA. Robusto y sensible, el sistema permite la detección precisa de miRNA en muestras con bajo contenido de ARN, como suero, plasma y orina. Tanto el cebador de amplificación por PCR directa como la sonda marcada con FAM y dark quencher son específicos para miRNA y están optimizados con tecnología LNA, lo que mejora el rendimiento del ensayo. Los ensayos para todos los miRNA importantes se validan en banco húmedo. Además de los ensayos prediseñados, que cubren todos los miRNA en miRBase, se pueden crear fácilmente ensayos de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA personalizados para cualquier miRNA de interés utilizando el mismo algoritmo de diseño.

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Actuación

Detección de alta sensibilidad de señales reales

La excepcional sensibilidad de los ensayos de sonda miRCURY LNA miRNA se logra combinando la transcripción inversa universal con cebadores y sondas específicos para miRNA, potenciados por LNA y normalizados por Tm. Esta combinación permite una cuantificación precisa y fiable de miRNA individuales desde tan solo 1 pg de ARN total o hasta una molécula sin preamplificación (véase "Cuantificación precisa incluso con material de partida bajo y eficiencia excepcional en un amplio rango dinámico"). La sensibilidad y la rapidez del flujo de trabajo hacen que el sistema sea especialmente adecuado para muestras de suero o plasma, y ​​las enzimas QuantiNova garantizan resultados altamente reproducibles entre réplicas técnicas y biológicas a la primera, ahorrando material de muestra y tiempo.

En comparación con otros sistemas de PCR basados ​​en sondas de miRNA que dependen solo de la sonda para generar especificidad, el cebador y la sonda mejorados con LNA de los ensayos de sonda de miRNA miRCURY LNA son específicos de miRNA y lo suficientemente cortos como para evitar la superposición cuando se unen al objetivo (ver Sistema de PCR de sonda de miRNA miRCURY LNA de un vistazo). Como resultado, los ensayos de sonda de miRNA miRCURY LNA superan a las soluciones alternativas en términos de eficiencia (ver Eficiencia mejorada en comparación con soluciones alternativas), linealidad y sensibilidad sin preamplificación (ver Linealidad mejorada y alta sensibilidad sin preamplificación). Combinada con una excelente relación señal-ruido (ver Detección precisa incluso con alto fondo de ARN), esta característica única permite discriminar miRNA estrechamente relacionados con diferencias de secuencia de tan solo un nucleótido (ver Poder discriminatorio hasta una única diferencia de nucleótido).

Validado y optimizado

Los diseños de los ensayos (cebador y sonda) se basan en un algoritmo de diseño creado por expertos en LNA y ensayos. Este completo algoritmo evalúa y optimiza 60 parámetros, validados in silico según criterios de rendimiento muy estrictos, para garantizar un diseño con la máxima sensibilidad. El resultado son ensayos capaces de detectar hasta una copia de miARN. Los ensayos para todos los miARN importantes también están completamente validados en laboratorio.

Cobertura

Hay más de 30.000 ensayos disponibles que cubren la totalidad de miRBase 22. Más de 1.000 ensayos están completamente validados en laboratorio para evaluar la sensibilidad, especificidad, eficiencia y el fondo. Los ensayos restantes se validan in silico mediante un algoritmo de diseño integral con estrictos criterios de rendimiento que garantizan ensayos de alta calidad, específicos de cada especie y mejorados con LNA, con una sensibilidad y especificidad óptimas para cada organismo. Si trabaja con nuevos miRNA, como los de un experimento de NGS, diseñe su propio ensayo con los ensayos de PCR de sonda personalizada miRCURY LNA miRNA.

Rápido y fácil

El protocolo fácil de seguir, de 2 horas de duración, ahorra tiempo y mano de obra. Al utilizar una transcripción universal, así como protocolos optimizados de RT-PCR, el procedimiento se simplifica considerablemente en comparación con otras soluciones. Además, el ADNc generado en el paso de RT se puede utilizar en todo el sistema de PCR de sonda miRCURY LNA miRNA, lo que permite una transición fluida de paneles a ensayos según las necesidades de su investigación, ahorrando material de muestra y tiempo. El número de pasos de pipeteo se reduce al mínimo, lo que también minimiza la variación técnica. La robustez del ensayo permite la configuración a temperatura ambiente y las ejecuciones diferidas para una mayor flexibilidad y uso en la automatización (véase Estabilidad de la reacción y robustez de la configuración). Este flujo de trabajo simplificado, junto con la fabricación de ensayos conforme a la norma ISO (véase Alta consistencia entre lotes), permite lograr una reproducibilidad extremadamente alta día a día y de sitio a sitio.

Principio

Nombre del producto: Tipo de control
Ensayo de sonda de miRNA UniSp2 miRCURY LNA: ensayo de control de adición
Ensayo de sonda de miRNA UniSp4 miRCURY LNA: ensayo de control de adición
Ensayo de sonda de miRNA UniSp5 miRCURY LNA: ensayo de control de adición
Ensayo de sonda de miRNA UniSp6 miRCURY LNA: ensayo de control RT
Ensayo de sonda de miRNA UniSp9 miRCURY LNA: calibrador interplaca IPC
Ensayo de sonda de miRNA cel-miR-39-3p miRCURY LNA: ensayo de control RT

Nombre del producto: Organismo objetivo
Conjunto de cebadores de control, SNORD38B (hsa): hsa
Conjunto de cebadores de control, SNORD44 (hsa): hsa
Conjunto de cebadores de control, SNORD48 (hsa): hsa
Conjunto de cebadores de control, SNORD49A (hsa): hsa
Conjunto de cebadores de control, SNORA66 (hsa): hsa
Conjunto de cebadores de control, ARNr 5S (hsa): hsa, mmu
Conjunto de cebadores de control, ARNm U6 (hsa, mmu): hsa, mmu, rno
Conjunto de cebadores de control, ARNm pequeño RNU5G (mmu, hsa): mmu, hsa, rno
Conjunto de cebadores de control, RNU1A1 (mmu, hsa): mmu, hsa, rno
Conjunto de cebadores de control, SNORD65 (mmu): mmu
Conjunto de cebadores de control, SNORD68 (mmu): mmu
Juego de cebadores de control, SNORD110 (mmu): mmu

El sistema de PCR con sonda miARN miRCURY LNA permite la cuantificación y el perfilado de miARN sensibles y específicos mediante PCR en tiempo real. La detección se basa en una sonda marcada con FAM y una sonda de hidrólisis marcada con extintor oscuro. El sistema abarca todos los pasos de la conversión de miARN a ADNc y la posterior detección de miARN mediante qPCR. Los ensayos de PCR con sonda miRCURY LNA miARN se han validado con la mezcla maestra de sondas QuantiNova; el uso de otros reactivos para qPCR afectará los resultados.

Kit de adición de ARN para RT

El kit de adición de ARN permite el control de calidad del aislamiento de ARN, la síntesis de ADNc y la amplificación por PCR de los experimentos de PCR con la sonda miARN miRCURY LNA, lo que permite identificar muestras de baja calidad en las primeras etapas del proceso y ahorrar tiempo y reactivos. El kit incluye la mezcla de plantillas de adición de ARN UniSp2, UniSp4 y UniSp5 y la plantilla de adición de ARN cel-miR-39-3p.

Kit de radioterapia LNA miRCURY

Un kit universal de transcripción inversa para dos sistemas de detección. El kit miRCURY LNA RT se utiliza tanto para el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA, que emplea SYBR Green para la detección, como para el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA con sonda. El kit incluye dos tampones de reacción específicos para cada sistema y todos los reactivos necesarios para realizar la poliadenilación y la transcripción inversa de miARN de forma rápida y sencilla en un solo paso.

Kit de PCR de sonda LNA miRCURY

Optimizado y específico para el sistema de PCR de sonda miARN miRCURY LNA, este kit contiene la mezcla maestra de sonda QuantiNova de alto rendimiento y el cebador inverso universal de sonda miRCURY. Combinado con un ensayo de PCR de sonda miARN miRCURY LNA o un panel de PCR de sonda miARN miRCURY LNA, la química permite la detección de miARN mediante PCR cuantitativa en tiempo real.

Ensayos de PCR de sonda miARN miRCURY LNA

Estos ensayos de cebadores y sondas utilizan sondas de hidrólisis específicas de miARN y cebadores directos específicos de miARN diseñados para detectar miARN maduros utilizando la información de secuencia más actualizada de miRBase 22. El cebador inverso universal de sonda miRCURY está incluido en el kit de PCR de sonda miRCURY.

Paneles de PCR de sonda miARN LNA miRCURY

Placas de panel de PCR prediseñadas, listas para usar y de un solo uso para perfilar rápidamente miRNA maduros centrándose en el miRNoma, vías específicas, ciertos tipos de muestras como suero/plasma o en un panel personalizado diseñado por el usuario.

Centro de análisis de datos GeneGlobe

Esta herramienta de análisis gratuita basada en la web lo guía paso a paso a través de un asistente sencillo a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras listas para publicar.

Ensayos de adición

Ensayos de control

Procedimiento

El primer paso, la reacción de transcripción inversa, es una reacción fácil de realizar en un solo tubo. El ARN total, incluyendo el miARN, se utiliza como material de partida y el ADNc resultante se utiliza en la amplificación por PCR en tiempo real con cebadores potenciados con LNA y una sonda de hidrólisis para detectar los miARN maduros. Esto permite una cuantificación y perfilación sencillas de miARN, accesibles para cualquier laboratorio con un ciclador de PCR en tiempo real.

Aplicaciones

- Detección, perfilado y cuantificación de la expresión de miRNA
- Desarrollo de biomarcadores de miRNA: detección e identificación
- Regulación y análisis de vías de miRNA
- Detección de miRNA en tipos de muestras complejos y muestras con niveles bajos de expresión de miRNA (por ejemplo, exosomas, suero, plasma, orina, secciones FFPE)
- detección de snoRNA
- Validación de la secuenciación de miRNA

Los ensayos de PCR de sonda de miRNA miRCURY LNA se utilizan como parte del sistema de PCR de sonda de miRNA miRCURY LNA para: