Qiagen, 339373, Kit de PCR de sonda LNA miRCURY (4000)

Para 4000 reacciones: 2X QuantiNova Probe Master Mix, 10X miRCURY Probe Univ. Primer, colorante de referencia Rox, agua sin ARNasa

Características

- Optimizado y dedicado para ensayos y paneles de PCR de sonda miRNA LNA miRCURY
- Los componentes de PCR específicos de miRNA y mejorados con LNA cortos eliminan la amplificación no específica y los dímeros de cebadores.
- Rendimiento sensible y específico con las últimas enzimas QuantiNova
- Alta robustez de reacción para configuración y automatización a temperatura ambiente
- Incluye el cebador inverso universal de PCR de sonda miRCURY

Detalles del producto

Los kits de PCR miRCURY Probe contienen una mezcla maestra de PCR de alto rendimiento, diseñada específicamente para la cuantificación de miARN mediante sondas mediante ensayos y paneles de PCR miRCURY LNA miARN Probe. La transcriptasa inversa se realiza con el kit miRCURY LNA RT. Los kits de PCR miRCURY Probe se han optimizado para su uso con cualquier termociclador en tiempo real.

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Actuación

Posibilidades únicas de diseño de cebadores y sondas

El sistema de PCR de sonda miRNA miRCURY LNA es un innovador sistema de detección y cuantificación de miRNA que utiliza tecnología LNA para permitir nuevos diseños de cebadores y sondas que mejoran considerablemente la especificidad y la sensibilidad del ensayo. Por un lado, los cebadores y la sonda mejorados con LNA tienen una Tm más alta, lo que aumenta la rigurosidad de la reacción y permite discriminar entre miRNA que difieren en un solo nucleótido, independientemente del contenido de AU. Por otro lado, el cebador y la sonda directos son específicos de miRNA y más cortos que en otros sistemas de detección (ver Sistema de PCR de sonda miRNA miRCURY LNA de un vistazo). Por lo tanto, el diseño del ensayo es más flexible y la colocación inteligente de los LNA mejora considerablemente la especificidad y la sensibilidad del ensayo. De hecho, el sistema permite cuantificar hasta 1 copia de un miRNA diana sin preamplificación. Además, el flujo de trabajo es rápido y sencillo, pasando del ARN a los datos en 2 horas, y la excepcional robustez del ensayo permite la configuración a temperatura ambiente y las ejecuciones diferidas para una mayor flexibilidad y uso en la automatización (ver Estabilidad de la reacción y robustez de la configuración). Las enzimas QuantiNova garantizan resultados altamente reproducibles entre réplicas técnicas y biológicas en el primer intento (ver Principio del novedoso mecanismo de inicio en caliente de QuantiNova).

Rápido y fácil

El protocolo, fácil de seguir y de 2 horas, ahorra tiempo y esfuerzo. Al utilizar una transcripción universal y protocolos optimizados de RT-PCR, el procedimiento se simplifica considerablemente en comparación con otras soluciones. Además, el ADNc generado en el paso de RT puede utilizarse en todo el sistema de PCR miRCURY LNA miRNA Probe, lo que permite una transición fluida de paneles a ensayos según las necesidades de su investigación, ahorrando material de muestra y tiempo. El número de pasos de pipeteo se reduce al mínimo, lo que también minimiza la variación técnica. Este flujo de trabajo simplificado, junto con la fabricación de ensayos conforme a las normas ISO (véase Alta consistencia entre lotes), permite lograr una reproducibilidad extremadamente alta día a día y entre centros.

Principio

Reactivos de alto rendimiento para RT-PCR cuantitativa en tiempo real

El sistema de PCR con sonda miRCURY LNA miRNA permite la cuantificación y el perfilado de miRNA sensibles y específicos mediante PCR en tiempo real. La detección se basa en una sonda de hidrólisis marcada con un extintor. El sistema abarca todos los pasos de la conversión de miRNA a ADNc y la posterior detección de miRNA mediante qPCR. Los ensayos y paneles de PCR con sonda miRCURY LNA miRNA se han validado con la mezcla maestra de sondas QuantiNova; el uso de otros reactivos para qPCR afectará los resultados.

Kit de adición de ARN para RT

El kit de adición de ARN permite el control de calidad del aislamiento de ARN, la síntesis de ADNc y la amplificación por PCR de los experimentos de PCR con la sonda miARN miRCURY LNA, lo que permite identificar muestras de baja calidad en las primeras etapas del proceso y ahorrar tiempo y reactivos. El kit incluye la mezcla de plantillas de adición de ARN UniSp2, UniSp4 y UniSp5 y la plantilla de adición de ARN cel-miR-39-3p.

Kit de radioterapia LNA miRCURY

Un kit universal de transcripción inversa para dos sistemas de detección. El kit miRCURY LNA RT se utiliza tanto para el sistema de PCR de miARN miRCURY LNA, que utiliza SYBR® Green para la detección, como para el sistema de PCR de sonda de miARN miRCURY LNA basado en sonda. El kit incluye dos tampones de reacción específicos para cada sistema y todos los reactivos necesarios para realizar la poliadenilación y la transcripción inversa de miARN de forma rápida y sencilla en un solo paso.

Kit de PCR de sonda miRCURY

Este kit contiene la mezcla maestra de sonda QuantiNova de alto rendimiento y el cebador inverso universal para PCR de sonda miRCURY. Combinado con un ensayo de miARN miRCURY LNA (CR) o un panel de PCR de sonda miRCURY LNA miARN, la química permite la detección de miARN mediante PCR cuantitativa en tiempo real.

Ensayos de PCR de sonda miARN miRCURY LNA

Estos ensayos de cebadores y sondas utilizan sondas de hidrólisis específicas para miARN y cebadores directos específicos para miARN, diseñados para detectar miARN maduros utilizando la información de secuencia más actualizada de miRBase. El cebador inverso universal de la sonda miRCURY se incluye en el kit de PCR de la sonda miRCURY.

Paneles de PCR de sonda miARN LNA miRCURY

Placas de panel de PCR prediseñadas, listas para usar y de un solo uso para perfilar rápidamente miRNA maduros centrándose en el miRNoma, vías específicas, ciertos tipos de muestras como suero/plasma o en un panel personalizado diseñado por el usuario.

Centro de análisis de datos GeneGlobe

Esta herramienta de análisis intuitiva y gratuita basada en la web lo guía paso a paso a través de un asistente sencillo a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras listas para publicar.

Procedimiento

El primer paso, la reacción de transcripción inversa, es una reacción fácil de realizar en un solo tubo. El ARN total, incluyendo el miARN, se utiliza como material de partida y el ADNc resultante se utiliza en la amplificación por PCR en tiempo real con una sonda y un cebador mejorados con LNA para detectar los miARN maduros. Esto permite una cuantificación y perfilación sencillas de miARN, accesibles para cualquier laboratorio con un ciclador de PCR en tiempo real.

Aplicaciones

- Detección, perfilado y cuantificación de la expresión de miRNA
- Desarrollo de biomarcadores de miRNA: detección e identificación
- Regulación y análisis de vías de miRNA
- Detección de miRNA en tipos de muestras complejos y muestras con niveles bajos de expresión de miRNA
- detección de snoRNA
- Validación de la secuenciación de miRNA

Los kits de PCR de sonda miRCURY se utilizan como parte del sistema de PCR de sonda miRNA LNA miRCURY para: