Qiagen, 34850, anticuerpo Strep-tag (100 μg)

Anticuerpo monoclonal de ratón que reconoce el epítopo Strep-tag II; liofilizado, para 1000 ml de solución de trabajo

Características

- Excelentes resultados en procedimientos de punto y western blotting
- Detección altamente sensible y específica

Principio

El Sistema de Purificación por Afinidad en Dos Pasos, basado en la etiqueta 6xHis de eficacia probada y la etiqueta Strep II corta, permite una purificación sencilla y altamente eficiente de proteínas ultrapuras mediante un procedimiento rápido y estandarizado. Las proteínas recombinantes que portan ambas etiquetas se purifican secuencialmente en matrices Ni-NTA y Strep-Tactin (véase la figura "Proteína ultrapura en dos pasos"). Las dos sencillas purificaciones por afinidad proporcionan una proteína ultrapura, de longitud completa y totalmente activa, apta para cualquier aplicación posterior.

Procedimiento

Las proteínas recombinantes que llevan dos pequeñas etiquetas de afinidad (la etiqueta 6xHis y la etiqueta Strep -II) se expresan eficientemente en células de E. coli, insecto o mamífero usando vectores pQE-TriSystem His· Strep. Después de la lisis celular y la limpieza del lisado, las proteínas se purifican inicialmente usando un procedimiento de cromatografía de afinidad de metal inmovilizado que se basa en la interacción probada 6xHis-tag-Ni-NTA. Después de la elución de la matriz Ni-NTA usando imidazol, las proteínas recombinantes (que también llevan el epítopo Strep -tag II) se cargan directamente en una matriz Strep -Tactin. No se requiere intercambio de tampón. La proteína se eluye de la matriz Strep -Tactin usando biotina o destiobiotina. Esta purificación por afinidad de dos pasos proporciona proteína ultrapura (>98% pura) (ver figura Procedimiento de purificación por afinidad de dos pasos). El orden de purificación puede invertirse (es decir, purificación con Strep-Tactin seguida de purificación con Ni-NTA). Las proteínas pueden detectarse con alta especificidad y sensibilidad mediante anticuerpos monoclonales de ratón Strep-tag o anti-His.

Aplicaciones

- Análisis estructurales y funcionales
- Expresión en sistemas eucariotas

El sistema de purificación por afinidad en dos pasos, que utiliza el anticuerpo Strep-tag para la detección, es ideal para aplicaciones donde la alta pureza es fundamental o difícil de lograr. El procedimiento de purificación estandarizado también aumenta el rendimiento al eliminar la necesidad de desarrollar y optimizar protocolos de purificación específicos para cada proteína. La pureza ultraalta y la comodidad que ofrece el sistema de purificación por afinidad en dos pasos lo convierten en el método predilecto para: