Qiagen, 387016, Kit Quantiplex para investigadores (200)

Mezcla de cebadores FQ, mezcla de reacción YQ, ADN de control M1, tampón de dilución de ácidos nucleicos

Cuantificación simultánea de ADN humano total o humano y masculino
Evaluación de calidad sencilla para obtener información confiable sobre la degradación del ADN en correlación con sus perfiles STR
Resultados confiables con sensibilidad de hasta <1 pg/µL de ADN
Alta sensibilidad para el ADN masculino en un contexto femenino
Control interno integrado para comprobar la amplificación o inhibición de la PCR

Los kits Investigator Quantiplex son ensayos de PCR cuantitativos en tiempo real listos para usar para pruebas de identidad humana y aplicaciones forenses con entrada de muestra convencional de 2 µL o flexible de 1 a 18 µL (
Kit Quantiplex Pro FLX para investigadores
Desarrollados para una sensibilidad y velocidad de reacción superiores, están diseñados para determinar si una muestra contiene suficiente ADN humano intacto para permitir el análisis de STR o SNP mediante electroforesis capilar o NGS. Se utiliza un control de amplificación interno (CI) para comprobar la amplificación exitosa e identificar la presencia de inhibidores de PCR. La tecnología Investigator Quantiplex Pro también permite la evaluación de calidad para proporcionar información fiable sobre el estado de degradación de la muestra.
Los kits Investigator Quantiplex cumplen con los requisitos de la norma ISO 18385.

Los kits Investigator Quantiplex Pro proporcionan resultados de cuantificación robustos y precisos con alta sensibilidad dentro de un amplio rango dinámico. Además de la sensibilidad general, los kits ofrecen una sensibilidad excepcionalmente alta para el ADN masculino, incluso con un fondo muy alto de ADN femenino (hasta 400.000:1).
El sencillo sistema de evaluación de calidad incluido en los kits consta de un Control de Degradación del ADN (CD) de nuevo desarrollo y un Control Interno (CI) de nuevo diseño. El nuevo Control de Degradación del ADN proporciona una detección superior de la degradación del ADN (véanse las figuras “
Detección precisa de la degradación del ADN
" y "
Detección precisa de la degradación del ADN masculino en una mezcla de muestras
”). Además, el ensayo Investigator Quantiplex Pro RGQ es el único ensayo disponible comercialmente que puede distinguir entre la degradación del ADN humano y masculino (ver figura “
Resultados de detección altamente precisos y sensibles para ADN humano total y masculino
El nuevo control interno (CI) detecta de forma fiable los posibles inhibidores de la PCR. El CI es más sensible a los inhibidores y se correlaciona con la tolerancia a los STR, mientras que los resultados de cuantificación siguen siendo fiables (véase la figura "
Identificación de la inhibición de la PCR
”). Además, el CI de los kits Investigator Quantiplex Pro es análogo al sensor de calidad de los ensayos de PCR Investigator STR QS (por ejemplo, kits Investigator 24plex QS, kits Investigator 26plex QS, kit Investigator ESSplex SE QS y kit Investigator Argus X-12 QS).

El ADN humano aislado de diversas fuentes debe evaluarse en términos de cantidad, calidad e integridad antes de los análisis de STR. Los multiplex de STR son sistemas complejos que requieren un rango muy preciso de ADN de entrada y calidad del molde para un rendimiento preciso. Dado que la cuantificación del ADN es el único paso previo a la PCR de STR, es esencial extraer la mayor cantidad de información posible de esta reacción para facilitar la correcta configuración de las reacciones de STR.
Los kits Investigator Quantiplex Pro son un sistema listo para usar para la detección de ADN humano y masculino, así como para la evaluación paralela de la degradación del ADN mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Estos kits proporcionan una cuantificación rápida y precisa del ADN humano a partir de muestras de bases de datos forenses y casos clínicos.
La detección de la amplificación se realiza mediante sondas TaqMan y una PCR rápida. Las sondas de doble marcado contienen un reportero fluorescente y un extintor en sus extremos 5' y 3', respectivamente. Durante la fase de extensión de la PCR, la actividad exonucleasa 5' y 3' de la ADN polimerasa separa el fluoróforo del extintor. Esto produce una fluorescencia detectable proporcional a la cantidad de producto de PCR acumulado. La información sobre las dianas, la longitud de los amplicones, los canales, la ploidía y el número de copias se resume en la tabla "Dianas, longitud de los amplicones y canales para los kits Investigator Quantiplex".
Objetivos, longitudes de amplicones y canales para los kits Investigator Quantiplex
Equipo
Objetivo
Longitud del amplicón
Canal
Ploidía
Número de copia
Quantiplex
Objetivo humano
146 pb
FAM
Diploide
Copia múltiple
Control interno de PCR
200 pb
VIC
N / A
Fragmento sintético
Quantiplex Pro
Quantiplex Pro FLX
Objetivo humano, pequeños autos.
91 pb
FAM
Diploide
Copia múltiple
Objetivo humano, autos grandes.
353 pb
TAMRA/Atto550
Diploide
Copia múltiple
Objetivo humano masculino
81 pb
CY5/Atto647N
Haploide
Copia múltiple
Control interno de PCR
434 pb
JOSÉ
N / A
Fragmento sintético
Quantiplex Pro RGQ
Objetivo humano, pequeños autos.
91 pb
Amarillo
Diploide
Copia múltiple
Objetivo humano, autos grandes.
353 pb
Rojo
Diploide
Copia múltiple
Varón humano, Y pequeña
81 pb
Verde
Haploide
Copia múltiple
Varón humano, Y grande
359 pb
Naranja
Haploide
Copia múltiple
Control interno de PCR
434 pb
Carmesí
N / A
Fragmento sintético
NA = No aplicable

Los kits son un sistema listo para usar para la detección y cuantificación de ADN humano mediante PCR en tiempo real. Consulte la tabla "Especificaciones técnicas" para obtener más información. Para agilizar la configuración del instrumento y el análisis de los resultados, QIAGEN ha desarrollado un conjunto de plantillas. Descargue las plantillas desde la página de recursos del producto.
Al utilizar los sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 o QuantStudio 5 con el kit Investigator Quantiplex Pro, se requiere una calibración personalizada de colorantes para FAM, JOE, ATTO 550, ROX y ATTO 647N. Para un rendimiento óptimo, calibre con el kit de calibración Investigator Quantiplex Pro.

Los kits Investigator Quantiplex permiten cuantificar el ADN humano y masculino, determinar la presencia de inhibidores de PCR o degradación del ADN y si se requiere una mayor purificación de la muestra. Son adecuados para:
Bases de datos forenses y muestras de casos
Muestras de pruebas de paternidad
Muestras de agresión sexual
Identificación de víctimas de desastres y trabajo antropológico
Otras aplicaciones de pruebas de identidad humana

Especificaciones técnicas
Todos los objetivos son objetivos multicopia.
Características
Kit Quantiplex Pro para investigadores
Investigador Quantiplex Pro FLX
Kit Investigator Quantiplex Pro RGQ
Kit Quantiplex para investigadores
Volumen por PCR
20 µl
20 µL
20 µl
25 µl
Volumen de entrada de ADN plantilla
2 µl
1-18 µL
2 µl
2 µl
Objetivo humano, pequeño autosómico
91 pb
91 pb
91 pb
146 pb
Objetivo humano, autosómico grande
353 pb
353 pb
353 pb
-
Objetivo humano masculino, pequeño Y
81 pb
81 pb
81 pb
-
Objetivo humano masculino, gran Y
-
-
359 pb
-
Sondas
TaqMan
TaqMan
TaqMan
Escorpiones
Cicladores en tiempo real
Sistemas en tiempo real Applied Biosystems 7500 o sistemas en tiempo real QuantStudio 5
Sistema en tiempo real Applied Biosystems 7500 o sistemas QuantStudio5
Rotor-Gene Q, solo 5plex o 6plex
Rotor-Gene Q, 5plex o 6plex, sistemas en tiempo real Applied Biosystems 7500

El ADN genómico masculino se cortó con un ultrasonicador enfocado Covaris S220 a tamaños de fragmentos promedio de 1500 pb, 500 pb, 400 pb, 300 pb, 200 pb y 150 pb. [
A
] Cada tamaño de fragmento (4,6 ng) se analizó con el kit Investigator Quantiplex Pro RGQ. El rendimiento de otros dos kits disponibles comercialmente en las mismas condiciones de prueba se muestra en [
B
] y [
do
Todas las reacciones se configuraron y se realizaron según las instrucciones del fabricante. Se observó una mayor variación en el valor de CT para el fragmento L humano de QIAGEN en comparación con los kits de otros proveedores, lo que indica una evaluación más precisa de la calidad del ADN en la muestra. (Datos generados por el departamento de I+D de QIAGEN).

Una ejecución de 40 ciclos del Investigator Quantiplex Pro o Quantiplex Pro RGQ demora aproximadamente 60 minutos.
Para el Investigator Quantiplex en el Rotor-Gene Q, una serie de 40 ciclos dura aproximadamente 55 minutos. En el sistema de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500, una serie de 40 ciclos dura aproximadamente 57 minutos.