Qiagen, 387416, Kit de calibración Investigator Quantiplex Pro

Para usar en sistemas en tiempo real de Applied Biosystems: Estándar de calibración FAM (60 µl), Estándar de calibración JOE (60 µl), Estándar de calibración ATTO 550 (60 µl), Estándar de calibración ROX (60 µl), Estándar de calibración ATTO 647N (60 µl), Tampón de calibración Quantiplex Pro (30 ml)
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Características

- Cuantificación simultánea de ADN humano total o humano y masculino
- Evaluación de calidad sencilla para obtener información confiable sobre la degradación del ADN en correlación con sus perfiles STR
- Resultados confiables con sensibilidad de hasta <1 pg/µL de ADN
- Alta sensibilidad para el ADN masculino en un contexto femenino.
- Control interno integrado para comprobar la amplificación o inhibición de la PCR

Detalles del producto

Los kits Investigator Quantiplex son ensayos de PCR cuantitativos en tiempo real listos para usar para pruebas de identidad humana y aplicaciones forenses con entrada de muestra convencional de 2 µL o flexible de 1 a 18 µL (Kit Investigator Quantiplex Pro FLX). Desarrollados para una sensibilidad y velocidad de reacción superiores, están diseñados para determinar si una muestra contiene suficiente ADN humano intacto para permitir el análisis de STR o SNP mediante electroforesis capilar o NGS. Se utiliza un control de amplificación interno (CI) para comprobar la amplificación exitosa e identificar la presencia de inhibidores de PCR. La tecnología Investigator Quantiplex Pro también permite la evaluación de calidad para proporcionar información fiable sobre el estado de degradación de la muestra.

Los kits Investigator Quantiplex cumplen con los requisitos de la norma ISO 18385.

Actuación

Los kits Investigator Quantiplex Pro proporcionan resultados de cuantificación robustos y precisos con alta sensibilidad dentro de un amplio rango dinámico. Además de la sensibilidad general, los kits ofrecen una sensibilidad excepcionalmente alta para el ADN masculino, incluso con un fondo muy alto de ADN femenino (hasta 400.000:1).

El sencillo sistema de evaluación de calidad incluido en los kits comprende un Control de Degradación de ADN (CD) de nuevo desarrollo y un Control Interno (CI) de nuevo diseño. El nuevo Control de Degradación de ADN proporciona una detección superior de la degradación del ADN (véanse las figuras “Detección precisa de la degradación del ADN” y “Detección precisa de la degradación del ADN masculino en una mezcla de muestras”). Además, el ensayo Investigator Quantiplex Pro RGQ es el único ensayo disponible comercialmente que puede distinguir entre la degradación del ADN humano y masculino (véase la figura “Resultados de detección altamente precisos y sensibles para ADN masculino y humano total”). El Control Interno de nuevo diseño detecta de forma fiable posibles inhibidores de la PCR. El CI es más sensible a los inhibidores y se correlaciona con la tolerancia a STR, mientras que los resultados de cuantificación siguen siendo fiables (véase la figura “Identificación de la inhibición de la PCR”). Además, el CI de los kits Investigator Quantiplex Pro es análogo al sensor de calidad de los ensayos de PCR Investigator STR QS (por ejemplo, kits Investigator 24plex QS, kits Investigator 26plex QS, kit Investigator ESSplex SE QS y kit Investigator Argus X-12 QS).

Principio

Kit: Objetivo
Quantiplex: Objetivo humano
Control interno de PCR: 200 pb
Quantiplex Pro Quantiplex Pro FLX: Objetivo humano, pequeños autos.
Objetivo humano, grandes autos.: 353 pb
Objetivo humano masculino: 81 pb
Control interno de PCR: 434 pb
Quantiplex Pro RGQ: Objetivo humano, pequeños autos.
Objetivo humano, grandes autos.: 353 pb
Varón humano, pequeño Y: 81 pb
Varón humano, Y grande: 359 pb
Control interno de PCR: 434 pb

El ADN humano aislado de diversas fuentes debe evaluarse en términos de cantidad, calidad e integridad antes de los análisis de STR. Los multiplex de STR son sistemas complejos que requieren un rango muy preciso de ADN de entrada y calidad del molde para un rendimiento preciso. Dado que la cuantificación del ADN es el único paso previo a la PCR de STR, es esencial extraer la mayor cantidad de información posible de esta reacción para facilitar la correcta configuración de las reacciones de STR.

Los kits Investigator Quantiplex Pro son un sistema listo para usar para la detección de ADN humano y masculino, así como para la evaluación paralela de la degradación del ADN mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Estos kits proporcionan una cuantificación rápida y precisa del ADN humano a partir de muestras de bases de datos forenses y casos clínicos.

La detección de la amplificación se realiza mediante sondas TaqMan y una PCR rápida. Las sondas de doble marcado contienen un reportero fluorescente y un extintor en sus extremos 5' y 3', respectivamente. Durante la fase de extensión de la PCR, la actividad exonucleasa 5' y 3' de la ADN polimerasa separa el fluoróforo del extintor. Esto produce una fluorescencia detectable proporcional a la cantidad de producto de PCR acumulado. La información sobre las dianas, la longitud de los amplicones, los canales, la ploidía y el número de copias se resume en la tabla "Dianas, longitud de los amplicones y canales para los kits Investigator Quantiplex".

Procedimiento

Los kits son un sistema listo para usar para la detección y cuantificación de ADN humano mediante PCR en tiempo real. Consulte la tabla "Especificaciones técnicas" para obtener más información. Para agilizar la configuración del instrumento y el análisis de los resultados, QIAGEN ha desarrollado un conjunto de plantillas. Descargue las plantillas desde la página de recursos del producto.

Al utilizar los sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 o QuantStudio 5 con el kit Investigator Quantiplex Pro, se requiere una calibración personalizada de colorantes para FAM, JOE, ATTO 550, ROX y ATTO 647N. Para un rendimiento óptimo, calibre con el kit de calibración Investigator Quantiplex Pro.

Aplicaciones

- Base de datos forense y muestras de casos
- Muestras de pruebas de paternidad
- Muestras de agresión sexual
- Identificación de víctimas de desastres y trabajo antropológico
- Otras aplicaciones de pruebas de identidad humana

Los kits Investigator Quantiplex permiten cuantificar el ADN humano y masculino, determinar la presencia de inhibidores de PCR o degradación del ADN y si se requiere una mayor purificación de la muestra. Son adecuados para: