Qiagen, 387516, Kit Investigator Quantiplex Pro FLX (576)

Para usar en sistemas en tiempo real de Applied Biosystems: 6 placas de PCR ópticas de 96 pocillos en blíster individual con mezcla maestra, ADN de control M1 y tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect

Características

- Placas ópticas de 96 pocillos listas para usar, precargadas con qPCR Mastermix liofilizado
- Marcadores multicopia confiables para la evaluación avanzada de cantidad, degradación e inhibición
- Flexibilidad total con opción de escalar el volumen de entrada de 1 µL a 18 µL para lograr la máxima sensibilidad
- Placas rompibles y fácil extracción del sello para escalar el rendimiento necesario
- Almacenamiento sostenible a temperatura ambiente para liberar capacidad del congelador

Detalles del producto

El kit Investigator Quantiplex Pro FLX representa la próxima generación de cuantificación en pruebas de identificación humana. El kit combina marcadores multicopia de confianza para una evaluación avanzada de la cantidad, la degradación y la inhibición, con una novedosa química liofilizada en placas ópticas desprendibles de 96 pocillos (véase la figura). Características del Investigator Quantiplex Pro FLX: Facilidad de uso. Permite una mayor flexibilidad en los volúmenes de entrada de plantilla, desde 1 µL hasta 18 µL por reacción, y por lo tanto ofrece una mayor sensibilidad gracias a mayores volúmenes de entrada. El ADN purificado o los lisados ​​de muestra procesados ​​con el kit Investigator Casework GO! pueden utilizarse para qPCR. Los altos volúmenes de entrada de plantilla y los rápidos tiempos de preparación de la reacción hacen que el nuevo kit Investigator Quantiplex Pro FLX sea ideal para aplicaciones de alto rendimiento y enfoques de cribado donde la máxima sensibilidad es crucial. El kit está validado en los sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 o QuantStudio 5.

El Investigador Quantiplex Pro FLX cumple con los requisitos de la norma ISO 18385.

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Actuación

Con el aumento de la plantilla de muestra, el kit Investigator Quantiplex Pro FLX proporciona resultados de cuantificación robustos y precisos con la máxima sensibilidad dentro de un amplio rango dinámico. Además de esta sensibilidad, los kits ofrecen una sensibilidad excepcionalmente alta para el ADN masculino, incluso con un fondo muy alto de ADN femenino (hasta 400.000:1).

Los volúmenes de entrada 9 veces mayores resultan en una sensibilidad aproximadamente 10 veces mayor. Esto se demuestra mediante la dilución seriada de ADN masculino (véase la figura «Mayor sensibilidad con mayores volúmenes de entrada»), muestras aisladas de hisopos poscoitales y muestras simuladas con diluciones de semen (véase la figura «Mayor sensibilidad para el cribado de muestras de agresión sexual»), así como muestras de casos con bajo contenido de ADN de diferentes tipos de muestras, como sangre, saliva y semen (véase la figura «Muestras de casos con bajo contenido de ADN»).

Principio

El ADN humano aislado de diversas fuentes debe evaluarse en términos de cantidad, calidad e integridad antes de los análisis de STR. Tanto para métodos basados ​​en CE como en NGS, estos multiplex de STR son sistemas complejos que requieren un rango muy preciso de ADN de entrada y calidad de la plantilla para un rendimiento preciso. Dado que la cuantificación del ADN es el único paso previo a la PCR de STR, es esencial extraer la mayor cantidad de información posible de esta reacción para facilitar la correcta configuración de las reacciones de STR. El nuevo kit de cuantificación Investigator Quantiplex Pro FLX combina marcadores multicopia de confianza para una evaluación avanzada de la cantidad, la degradación y la inhibición, con una novedosa química liofilizada en placas ópticas desprendibles de 96 pocillos. La química liofilizada permite una mayor flexibilidad en volúmenes de entrada de plantilla de hasta 18 µL por reacción.

La detección de la amplificación se realiza mediante sondas TaqMan y una PCR rápida. Las sondas de doble marcado contienen un reportero fluorescente y un extintor en sus extremos 5' y 3', respectivamente. Durante la fase de extensión de la PCR, la actividad exonucleasa 5' y 3' de la ADN polimerasa separa el fluoróforo del extintor. Esto produce una fluorescencia detectable proporcional a la cantidad de producto de PCR acumulado. La información sobre las dianas, la longitud del amplicón y el fluoróforo utilizado se puede encontrar en la tabla a continuación.

Procedimiento

Investigator Quantiplex Pro FLX es un sistema listo para usar para la detección y cuantificación de ADN humano mediante PCR en tiempo real. El producto químico se suministra precargado como mezcla maestra liofilizada en una placa óptica de 96 pocillos, que se puede dividir en tiras de 8 pocillos. Las pestañas de extracción y la perforación del sello facilitan el desprendimiento de la lámina de las placas "rotas". Alternativamente, simplemente añada 1/3 de una película adhesiva estándar para despegar fácilmente el sello de una sola vez. La plantilla y los estándares se pueden añadir de forma manual o automática. En ambas configuraciones, selle las placas con una lámina adhesiva óptica, agite en vórtex y centrifugue brevemente.

Al utilizar los sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 o QuantStudio 5 con Investigator Quantiplex Pro FLX, se requiere una calibración personalizada de colorantes para FAM, JOE, ATTO 550, ROX y ATTO 647N. Para un rendimiento óptimo, calibre con el kit de calibración Investigator Quantiplex Pro.

Aplicaciones

- Detección de agresión sexual
- Muestras especiales que requieren la máxima sensibilidad
- Aplicaciones de alto rendimiento

El kit Investigator Quantiplex Pro FLX es ideal para:

El almacenamiento a temperatura ambiente hace que el kit también sea adecuado para laboratorios móviles de identificación de víctimas de desastres.