Qiagen, 397082, AdnaTest EMT-2/Celda madre

Para el aislamiento de CTC y el posterior análisis de EMT, células madre cancerosas y características del cáncer de mama. El kit está diseñado para la determinación de 12 marcadores de EMT.

Características

- Aislamiento y detección eficiente de CTC de sangre completa
- Caracterización molecular de CTC
- Alta especificidad y sensibilidad
- Captura de células EMT y células madre

Procedimiento

Gen objetivo: tamaño del fragmento de PCR (pb)
PI3Kα: 551
AKT-2: 309
GIRO1: 201
Actina (control interno de PCR): 120

Gen objetivo: tamaño del fragmento de PCR (pb)
ALDH1: 161

Gen diana: tamaño del fragmento de PCR (pb)
GA733-2: 395
CEA: 231
EGFR: 163
Actina (control interno de PCR): 120

Gen diana: tamaño del fragmento de PCR (pb)
GA733-2: 395
Muc-1: 299
Ella-2: 265
Actina (control interno de PCR): 120

Gen diana: tamaño del fragmento de PCR (pb)
PSMA: 449
Anuncio de servicio público: 357
EGFR: 163
Actina (control interno de PCR): 120

El AdnaTest utiliza un proceso de dos pasos (Seleccionar y Detectar) para generar resultados en 5 horas (ver figuras “ Flujo de trabajo de AdnaTest ”). AdnaTest EMT-2/StemCellSelect permite el enriquecimiento inmunomagnético de células tumorales de sangre completa a través de antígenos epiteliales y asociados a tumores. Los anticuerpos contra antígenos epiteliales y asociados a tumores se conjugan con perlas magnéticas para el marcaje de células tumorales. Las células marcadas se extraen mediante un concentrador de partículas magnéticas (AdnaMag-L y AdnaMag-S), se lisan y luego se purifica el ARNm de estos lisados ​​(ver figuras “ AdnaTest Select – Selección de células inmunomagnéticas con múltiples anticuerpos asociados a tumores marcados con perlas magnéticas ”). En el segundo paso, el ARNm aislado se transcribe a ADNc y se puede amplificar utilizando PCR multiplex (ver figuras “ AdnaTest Detect – PCR multiplex de varios marcadores tumorales asociados al cáncer ”). AdnaTest EMT-2/StemCellDetect contiene microesferas recubiertas de Oligo (dT) 25 para el aislamiento de ARNm del lisado de células tumorales preenriquecidas. La transcripción inversa produce ADNc que posteriormente puede utilizarse como plantilla para la detección y caracterización de células tumorales mediante PCR multiplex. Esta PCR proporciona perfiles de expresión génica asociados a tumores para diversos marcadores tumorales de EMT.

Los objetivos

TWIST Los factores de transcripción básicos de hélice-bucle-hélice (bHLH) se han implicado en la determinación y diferenciación del linaje celular. La proteína codificada por este gen es un factor de transcripción bHLH y comparte similitud con otro factor de transcripción bHLH, Dermo1. Se expresa ampliamente en el tejido placentario y en los tejidos adultos derivados del mesodérmico. Twist se une a los elementos E-box del promotor Akt2, lo que mejora su actividad transcripcional. Es probable que este factor de transcripción esté relacionado con el fenómeno de la EMT en las células cancerosas. Pi3K/Akt Pi3K activa las quinasas Ser/Thr de Akt1 y Akt2. Akt activado es responsable de la proliferación y tiene función antiapoptótica (inhibición de la actividad de la caspasa 9). Existen varias posibilidades que pueden causar que la cascada de señales Pi3K/Akt (mTOR) se desregule en el cáncer. Una posibilidad es la pérdida de la actividad de PTEN, que es un regulador de Pi3K que conduce a una activación permanente de la vía. Dado que la vía Pi3K/Akt también se activa a través de las tirosina quinasas, puede verse afectada en caso de sobreexpresión/mutación de EGFR y sobreexpresión de HER2. Otro activador es el receptor de IGF, que se ha descrito en el cáncer de mama para acortar potencialmente la dependencia de ER para la proliferación si se sobreexpresa. ALDH1 Utilizando sistemas experimentales in vitro e in vivo, se demostró (Ginestier et al 2007) que las células epiteliales mamarias humanas normales y cancerosas con mayor actividad de aldehído deshidrogenasa 1 (ALDH1) tienen propiedades madre/progenitoras. La sobreexpresión de ALDH1 en el tejido de tumores mamarios primarios se correlaciona significativamente con un mal pronóstico. En carcinomas de mama, la alta actividad de ALDH1 conduce a una mayor autorrenovación y tumores que imitan la heterogeneidad del tumor parental. AdnaTest EMT-2/StemCellDetect contiene microesferas recubiertas de Oligo (dT)25 para el aislamiento de ARNm del lisado de células tumorales preenriquecidas. La transcripción inversa produce ADNc, que posteriormente se utiliza como plantilla para la detección y caracterización de células tumorales mediante PCR multiplex. El PrimerMix EMT-1 permite la amplificación de tres genes relacionados con la EMT y un gen de control. El PrimerMix StemCell amplifica ALDH1, reconocido como marcador de células madre tumorales. La expresión génica asociada al cáncer de mama puede determinarse utilizando el PrimerMix BreastDetect. En conjunto, las diferentes mezclas de cebadores generan los siguientes fragmentos:

Opcionalmente, es posible el análisis de genes asociados al cáncer de mama, colon, próstata y ovario. El PrimerMix Colon Detect permite la amplificación de tres antígenos asociados a tumores y un gen de control. Los cebadores generan fragmentos de los siguientes tamaños:

El PrimerMix Breast Detect permite la amplificación de tres antígenos tumorales y un gen de control. Los cebadores generan fragmentos de los siguientes tamaños:

El PrimerMix Prostate Detect permite la amplificación de tres antígenos tumorales y un gen de control. Los cebadores generan fragmentos de los siguientes tamaños:

Es importante destacar que AdnaTest es una plataforma abierta que permite la elaboración de perfiles de objetivos de ARNm personalizados adicionales para el descubrimiento integral de biomarcadores.

Aplicaciones

- Aislamiento de CTC de sangre humana completa
- Caracterización molecular de CTC
- Descubrimiento de biomarcadores
- Perfil de ARNm
- Biopsia líquida