Qiagen, 51904, QIAamp ADN Microbioma libre de huésped (50)

El kit QIAamp DNA Host-Free Microbiome aísla selectivamente el ADN microbiano de muestras ricas en ADN del huésped, como tejidos, fluidos corporales e hisopos, lo que promueve un análisis preciso del microbioma debido al agotamiento eficiente del ácido nucleico del huésped.

Características

- La eliminación selectiva del ADN del huésped da como resultado ADN bacteriano purificado.
- Lisis mecánica y química optimizada para el aislamiento de ADN bacteriano
- Extracción de ADN de alta calidad ideal para mejorar las lecturas en metagenómica y adecuada para aplicaciones como dPCR y qPCR
- Protocolo simple y eficiente con reactivos listos para usar

Detalles del producto

El kit QIAamp DNA Host-Free Microbiome aísla selectivamente el ADN microbiano de muestras ricas en ADN del huésped, como tejidos, fluidos corporales e hisopos, lo que facilita un análisis preciso del microbioma gracias a la eficiente eliminación de ácidos nucleicos del huésped. Además, este kit extrae ADN bacteriano de alto rendimiento, ideal para la secuenciación metagenómica y apto para qPCR, dPCR y otras aplicaciones moleculares.

Actuación

El kit QIAamp DNA Host-Free Microbiome elimina el ADN del huésped a la vez que preserva la integridad del ADN microbiano (Figura 1). El ADN microbiano aislado es de alto rendimiento y prácticamente no presenta contaminación del huésped (Figura 2). Los métodos de disrupción mecánica y química mejoran la lisis y garantizan una alta recuperación de ADN (Figura 3). El ADN resultante es de alta pureza y puede utilizarse para diversas aplicaciones posteriores, como la secuenciación de nueva generación y los ensayos basados ​​en PCR.

Principio

Los microbios coevolucionaron con los humanos y otros animales como parte integral de la salud. Sin embargo, también influyen en las enfermedades. Los cambios en el microbioma, incluyendo la pérdida de, por ejemplo, la diversidad bacteriana (disbiosis), contribuyen a las enfermedades inflamatorias y tumorales.

La secuenciación directa del ARNr 16S analiza los perfiles taxonómicos bacterianos y la relación entre la disbiosis y diversas enfermedades. Sin embargo, los tejidos, hisopos y fluidos corporales contienen mucho más ADN del huésped que ADN bacteriano. Esta contaminación del ADN del huésped reduce la eficiencia del análisis y reduce el coste de lecturas valiosas en estudios de secuenciación metagenómica. El kit QIAamp DNA Host-Free Microbiome soluciona este desequilibrio eliminando el ADN del huésped. Es ideal para la secuenciación metagenómica y admite aplicaciones como qPCR, PCR digital y secuenciación del gen ARNr 16S para un perfil microbiano completo.

Los ácidos nucleicos del huésped se degradan selectivamente antes del aislamiento del ADN microbiano. Durante la depleción, las células bacterianas permanecen intactas, lo que resulta en un aislamiento de ADN microbiano altamente específico. Posteriormente, se realiza la purificación del ADN mediante columnas de centrifugación, lo que garantiza una unión y elución eficientes.

Procedimiento

Las muestras se tratan con una solución de depleción del huésped para digerir los ácidos nucleicos del huésped, manteniendo intactas las células bacterianas. A continuación, las células bacterianas se disgregan utilizando tubos PowerBead Pro y un tampón de lisis. Los lisados ​​se transfieren a minicolumnas de producción ultralimpias QIAamp, donde los ácidos nucleicos microbianos se adsorben en membranas de sílice. Dos tampones de lavado eliminan los contaminantes, garantizando un ADN de alta pureza. Finalmente, el ADN bacteriano purificado se eluye con agua libre de ARNasas, listo para aplicaciones posteriores.

Aplicaciones

El kit QIAamp DNA Host-Free Microbiome es ideal para la investigación del microbioma, la metagenómica y los estudios de enfermedades infecciosas. Es compatible con aplicaciones posteriores sensibles y es ideal para mejorar las lecturas en estudios metagenómicos. El ADN sin huésped también es adecuado para qPCR, PCR digital y secuenciación génica de ARNr 16S.