Qiagen, 59110, kit de bisulfito EpiTect 96 (2)

2 placas EpiTect de 96 pocillos con bisulfito, mezcla de reacción, tampón de protección de ADN, ARN transportador, tampones

Características

- Procedimiento optimizado para obtener resultados rápidos y confiables
- Conversión completa de citosina
- Sistema único de protección de ADN para un análisis de alta sensibilidad
- Protocolos optimizados, incluida la conversión de ADN FFPE
- Formatos de columna de centrifugación y placa de 96 pocillos para alto rendimiento

Detalles del producto

Los kits EpiTect Bisulfite permiten la conversión completa de citosinas no metiladas a uracilos y su posterior purificación en 6 horas. El procedimiento EpiTect 96 Bisulfite dura menos de 7 horas. Este método de alta sensibilidad utiliza una innovadora protección contra la degradación del ADN que garantiza resultados precisos, incluso con 1 ng de ADN, y asegura altas tasas de conversión superiores al 99 %. Gracias a su exclusiva tecnología DNA Protect, el ADN convertido con EpiTect Bisulfite es ideal para la amplificación de bisulfitomas completos con los kits EpiTect Whole Bisulfitome. Esto permite una amplificación fiable del ADN en casos donde la cantidad de ADN convertido con bisulfito es limitada. Los kits EpiTect Bisulfite incluyen un procedimiento en columna de centrifugación o en formato de 96 pocillos, y pueden procesarse mediante una centrífuga o un colector de vacío. Además, el kit EpiTect Bisulfite se puede automatizar completamente en QIAcube Connect.

Actuación

Procedimiento EpiTect: Procedimiento tradicional
Preparación de reactivos: 10 minutos; soluciones prealicuotadas
Reacción de bisulfito: 5 horas
Purificación: 30–45 minutos; columnas y placas de centrifugación EpiTect

Resultados rápidos

El procedimiento completo de centrifugación o vacío del Kit EpiTect Bisulfite —desde el ADN hasta el ADN puro convertido con bisulfito, listo para el análisis— toma solo 6 horas. El procedimiento con EpiTect 96 Bisulfite toma menos de 7 horas. Los procedimientos tradicionales de conversión con bisulfito pueden tardar más de 18 horas y requieren una amplia interacción del usuario (véase la tabla "Conversión rápida y sencilla con bisulfito" y la figura "Procedimiento que ahorra tiempo"). El Kit EpiTect Bisulfite proporciona todo lo necesario para una conversión con bisulfito y una limpieza de ADN exitosas.

Conversión completa del ADN

Cada reacción del kit EpiTect Bisulfite convierte entre 1 ng y 2 µg de ADN con la misma eficiencia. El novedoso procedimiento y los tampones optimizados permiten la recuperación de altos rendimientos de ADN convertido. La alta eficiencia de la conversión de citosina se evidencia en los bajos valores de CT obtenidos al amplificar el ADN convertido mediante PCR en tiempo real (véase la figura "Conversión completa de citosina"). El análisis del ADN convertido del kit EpiTect Bisulfite muestra una conversión superior al 99 % de citosinas no metiladas (véase la figura "Conversión de citosina de alta eficiencia"). Esta alta tasa de conversión proporciona un análisis posterior repetible y fiable.

Principio

Conversión de bisulfito de muestras difíciles

Debido a la cantidad limitada de ADN disponible, la determinación de patrones de metilación en ADN a partir de muestras valiosas y limitadas (p. ej., tejido fijado en formalina e incluido en parafina [FFPE] o tejido microdiseccionado) es especialmente difícil. Sin embargo, estos tipos de muestras son de especial interés para la identificación exitosa de biomarcadores valiosos para la predicción de enfermedades. Los kits de bisulfito EpiTect abordan estos desafíos con protocolos optimizados para estos tipos de muestras (véase la figura "Detección de metilación en muestras de tejido FFPE"). Se proporcionan todos los tampones y reactivos necesarios, y su manipulación es mínima.

Para la conversión directa con bisulfito de ADN de muestras FFPE, células, sangre y tejido sin aislamiento previo de ADN, recomendamos los kits de bisulfito EpiTect Plus FFPE y los kits de bisulfito EpiTect Plus LyseAll.

Prevención de la fragmentación del ADN

El tampón DNA Protect está formulado específicamente para prevenir la fragmentación del ADN (generalmente asociada con el tratamiento del ADN con bisulfito a altas temperaturas y bajos valores de pH) y proporcionar una desnaturalización eficaz del ADN, lo que resulta en el ADN monocatenario necesario para la conversión completa de citosina (véase "Tampón DNA Protect único y sistema indicador de pH"). La prevención de la fragmentación permite la posterior amplificación y el análisis de fragmentos grandes de PCR (véase la figura "Conversión rápida y sencilla con bisulfito"). El tampón DNA Protect también contiene un colorante indicador de pH, lo que permite confirmar el pH correcto para la conversión de citosina. La eficiente limpieza de ADN integrada permite almacenar el ADN convertido durante al menos 12 meses sin afectar su calidad (véase la figura "Almacenamiento de ADN a largo plazo").

Procedimiento

El procedimiento EpiTect consta de unos sencillos pasos, basados ​​en el sistema de unión, lavado y elución de QIAGEN (véase el diagrama de flujo "Procedimiento de conversión"). Tras la desnaturalización térmica y la conversión del ADN con bisulfito de sodio, el ADN se aplica a una columna o placa de centrifugación EpiTect donde, utilizando tampones optimizados y una microcentrífuga estándar o un colector de vacío, se lava para eliminar cualquier traza de bisulfito de sodio y se eluye. El ADN eluido puede utilizarse en todas las aplicaciones posteriores, como la PCR específica para la metilación, el análisis por PCR en tiempo real, la secuenciación con bisulfito, COBRA y la pirosecuenciación.

El acceso a la información epigenética es fundamental para muchas áreas de la investigación biológica y médica, en particular la oncología, pero también la investigación con células madre y la biología del desarrollo. Sin embargo, el análisis de los cambios en la metilación del ADN presenta dificultades debido a la falta de métodos estandarizados para obtener datos reproducibles, especialmente a partir de muestras limitadas. Con sus nuevas soluciones EpiTect, QIAGEN ofrece soluciones estandarizadas, preanalíticas y analíticas: desde la recolección, estabilización y purificación de muestras de ADN, hasta la conversión con bisulfito y el análisis o secuenciación de la metilación por PCR en tiempo real o de punto final (véase la figura "Flujos de trabajo estandarizados en epigenética").

Aplicaciones

- PCR específica de metilación, PCR en tiempo real
- COBRA
- Secuenciación/Pirosecuenciación/NGS
- Fusión de alta resolución
- Matrices de metilación

El ADN convertido y purificado mediante el kit de bisulfito EpiTect es adecuado para su uso en una variedad de aplicaciones posteriores, que incluyen: