Qiagen, 59203, Kit de bisulfitoma completo EpiTect (25)

REPLI-g Midi ADN polimerasa, tampón de reacción EpiTect WBA, agua sin nucleasas para 25 reacciones de amplificación de bisulfitomas completos

Características

- Alto rendimiento de ADN convertido con bisulfito para múltiples PCR
- Amplificación representativa del ADN convertido con bisulfito
- Configuración de reacción conveniente en un solo paso

Detalles del producto

El kit EpiTect Whole Bisulfitome proporciona ADN polimerasa, tampones y reactivos para la amplificación de todo el genoma convertido con bisulfito (el bisulfitoma) mediante tecnología de amplificación por desplazamiento múltiple (MDA). El kit EpiTect Whole Bisulfitome ha sido especialmente desarrollado para la amplificación de ADN tras la conversión con los kits EpiTect Bisulfite. Utiliza la probada tecnología REPLI-g y se ha adaptado a los requisitos específicos del ADN convertido con bisulfito (fragmentos de ADN más pequeños y composición nucleotídica alterada debido a la conversión con bisulfito), manteniendo al mismo tiempo la representación de la secuencia convertida. El rendimiento típico de ADN del kit EpiTect Whole Bisulfitome es de 1 a 3 μg por reacción, suficiente para hasta 300 análisis de PCR con una sola reacción de bisulfito de EpiTect.

Principio

El análisis de metilación de secuencias de ADN genómico puede verse limitado por la pequeña cantidad de muestra disponible. El kit EpiTect Whole Bisulfitome proporciona una amplificación altamente uniforme en todo el genoma convertido con bisulfito, con un sesgo de secuencia insignificante (véase la figura "Análisis EpiTYPER MALDI-TOF de ADN WBA"). El método se basa en la tecnología de amplificación por desplazamiento múltiple isotérmico (MDA). Una ADN polimerasa procesiva única con actividad de corrección de errores de exonucleasa 3'→5' mantiene una alta fidelidad durante el proceso de replicación.

El kit EpiTect Whole Bisulfitome se ha desarrollado específicamente con la probada tecnología REPLI-g y se ha adaptado a los requisitos específicos del ADN convertido con bisulfito (fragmentos de ADN de menor tamaño y composición nucleotídica modificada debido a la conversión con bisulfito), manteniendo al mismo tiempo la representación de la secuencia convertida. Los mejores resultados se obtienen al combinarse con los kits EpiTect Plus Bisulfite, que contienen un sistema DNA Protect de fórmula única. Esto permite una desnaturalización eficaz del ADN, necesaria para la conversión completa de citosina, y evita la fragmentación excesiva del ADN, generalmente asociada a las altas temperaturas y el bajo pH de la reacción de conversión con bisulfito. Prevenir la fragmentación del ADN permite la posterior amplificación de fragmentos grandes de ADN. Normalmente, se generan rendimientos de ADN de 1 a 3 μg por reacción con el kit EpiTect Whole Bisulfitome.

Procedimiento

La práctica configuración de la reacción en un solo paso implica la incubación del ADN molde convertido con bisulfito con una mezcla de tampón de reacción y ADN polimerasa REPLI-g. Tras la inactivación térmica de la polimerasa, el ADN amplificado está listo para su análisis o almacenamiento (véase la figura "Procedimiento WBA").

El acceso a la información epigenética es fundamental para muchas áreas de la investigación biológica y médica, en particular la oncología, pero también la investigación con células madre y la biología del desarrollo. Sin embargo, el análisis de los cambios en la metilación del ADN presenta dificultades debido a la falta de métodos estandarizados que permitan obtener datos reproducibles, especialmente a partir de muestras limitadas. Con sus nuevos productos EpiTect, QIAGEN ofrece soluciones estandarizadas, preanalíticas y analíticas, desde la recolección, estabilización y purificación de muestras de ADN hasta la conversión con bisulfito y el análisis o secuenciación de la metilación por PCR en tiempo real o de punto final (véase la figura "Flujos de trabajo estandarizados en epigenética").

Aplicaciones

El kit EpiTect de bisulfitoma completo es la herramienta ideal para proporcionar suficiente ADN para todos los análisis de metilación posteriores, cuando el ADN convertido con bisulfito es limitado. La reacción de amplificación produce suficiente ADN para 100-300 ensayos de PCR en tiempo real (p. ej., con los kits EpiTect MethyLight PCR) o PCR de punto final (p. ej., con los kits EpiTect MSP), estimando 10 ng de ADN amplificado por reacción.