Qiagen, 63181, Kit DyeEx 96 (4)

4 placas DyeEx 96; 4 placas de recolección de 48 pocillos

Características

- Procedimiento rápido con sólo dos pasos cortos de centrifugación
- Material de filtración en gel prehidratado listo para usar
- Eliminación eficiente de cualquier terminador de tinte

Detalles del producto

Los kits DyeEx incluyen columnas de centrifugación o placas de 96 pocillos y utilizan tecnología de filtración en gel para eliminar los terminadores de colorante de las reacciones de secuenciación, incluidas las reacciones de secuenciación Sanger. Las reacciones de secuenciación se cargan en el material de filtración en gel prehidratado. Tras una breve centrifugación, las reacciones están listas para cargarse en un secuenciador capilar. Los terminadores de colorante no incorporados se retienen en la matriz del gel.

Actuación

Procedimiento: DyeEx 2.0 Spin
Tiempo requerido* (12 muestras, formato centrifugado): 10 minutos
Tiempo requerido*† (formato de microplaca para 96 ​​muestras): NA
Manejo: Formato de centrifugado listo para usar
Calidad de la secuencia: ++

Los kits DyeEx eliminan cualquier tipo de terminador de colorante de las reacciones de secuenciación de 10-20 µl, incluyendo BigDye, colorante dRhodamine, rodamina, DYEnamic ET y terminadores WellRED. Tras la limpieza, las reacciones de secuenciación pueden separarse en cualquier secuenciador capilar. Recomendamos el kit DyeEx 96 con el protocolo optimizado.

Secuenciación de alta calidad

Los kits DyeEx están optimizados para una eliminación rápida y cómoda de terminadores de colorante, lo que resulta en resultados de secuenciación de alta calidad. Por el contrario, la limpieza de la reacción de secuenciación mediante precipitación con etanol requiere mucho tiempo (véase la tabla "Comparación del procedimiento DyeEx y la precipitación con etanol") y es ineficiente. La falta de una eliminación eficiente de los terminadores de colorante suele provocar la aparición de manchas de colorante en los datos de secuenciación, lo que hace ilegibles algunos tramos de la secuencia. El uso de los kits DyeEx para la limpieza de la reacción de secuenciación garantiza que las reacciones cargadas en los instrumentos de secuenciación estén libres de terminadores de colorante. Sin manchas de colorante, la secuencia es fácilmente legible en su totalidad (véase la figura "Resultados de secuenciación superiores"). Las intensidades de señal son altas, lo que resulta en longitudes de lectura largas (véase la figura "Secuencia de lectura larga").

Comparación del procedimiento DyeEx y la precipitación con etanol

NA: no aplicable

* No incluye el tiempo necesario para secar las muestras antes de cargar el gel (cuando corresponda). † Utilizando el protocolo estándar.

Principio

El procedimiento DyeEx utiliza la filtración en gel para eliminar rápida y eficientemente los terminadores no incorporados de las reacciones de secuenciación. La eliminación de los terminadores de colorante es importante para evitar que interfieran en el análisis de los resultados de la secuenciación. El material de filtración en gel DyeEx consiste en esferas con poros uniformes y separa las moléculas según su peso molecular. Al aplicar mezclas de reacción de secuenciación a las columnas DyeEx, los terminadores de colorante se difunden en los poros y se retienen en el material de filtración en gel, mientras que los fragmentos de ADN marcados se excluyen y se recuperan en el flujo continuo (véase la figura "Principio de separación DyeEx").

Procedimiento

La eliminación del terminador de colorante con los kits DyeEx es rápida gracias a la simplicidad del procedimiento (véanse los diagramas de flujo "Procedimiento de centrifugación DyeEx 2.0" y "Procedimiento del kit DyeEx 96"). Una centrifugación rápida elimina el tampón de almacenamiento de las columnas o pocillos, se cargan las muestras de secuenciación y una segunda centrifugación elimina los terminadores de colorante no incorporados. Las muestras están listas para su carga directa en un secuenciador capilar o se pueden secar, redisolver y cargar en un gel de secuenciación.

Aplicaciones

Los kits DyeEx eliminan cualquier tipo de terminador de colorante de las reacciones de secuenciación de 10 a 20 µl, incluyendo BigDye, colorante dRhodamine, rodamina, DYEnamic ET y terminadores WellRED. Tras la limpieza, las reacciones de secuenciación pueden separarse en cualquier secuenciador capilar. La intensidad de la señal es alta, lo que resulta en lecturas largas.