Qiagen, 674013, Kit de PCR CALR RGQ (24) RUO

Para 24 reacciones: Control CALR de tipo salvaje, Control CALR mutante, Mezcla de reacción CALR TYPE1, Mezcla de reacción CALR TYPE2, Mezcla de reacción CALR CLAMP1, Mezcla de reacción CALR CLAMP2, Mezcla de reacción CALR CLAMP3, Mezcla de reacción CALR CLAMP4, Mezcla de reacción CALR CLAMP5, Taq ADN polimerasa, tampón TE para dilución y NTC
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Características

- Detección fiable de mutaciones CALR
- Identificación de los tipos 1 y 2 en la misma ejecución de qPCR
- Soluciones todo en uno listas para usar, incluida la mezcla maestra QIAGEN
- Protocolos fáciles de usar validados en el QIAsymphony SP y el Rotor-Gene Q 5plex HRM
- El mismo flujo de trabajo que la prueba JAK2 V617F para optimizar el uso de la muestra y el tiempo de respuesta.

Detalles del producto

El kit CALR RGQ PCR está diseñado para la PCR en tiempo real en el Rotor-Gene Q 5plex HRM e incluye todos los reactivos necesarios. El kit está optimizado para la identificación específica y simultánea de las dos mutaciones principales de CALR (tipo 1 y tipo 2) y la detección de variantes menores adicionales de CALR en el ADN genómico, en la misma serie.

Actuación

Para garantizar la sensibilidad y la precisión, el kit CALR RGQ PCR se ha optimizado para realizar 7 reacciones de amplificación qPCR independientes en una sola ejecución para la identificación de las dos mutaciones principales de CALR (tipo 1 y tipo 2) y la detección de variantes menores adicionales en el ADN genómico extraído de sangre periférica completa humana.

Principio

El kit CALR RGQ PCR es un kit listo para usar para la detección de mutaciones somáticas en el exón 9 del gen que codifica CALR (anotación de ADNc de la región específica: c. 1091_1162) (1, 2). El kit utiliza la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real en el Rotor-Gene Q 5plex HRM. Para identificar mutaciones de CALR de tipo 1 y tipo 2, se logra una amplificación específica de alelos mediante la tecnología ARMS (Sistema de Mutación Refractaria de Alelos). Para la detección de variantes menores de mutaciones de CALR, se combinan cebadores y sondas para amplificar secuencias diana mutadas en las mezclas de reacción con un oligonucleótido bloqueado en 3' con la adición de un grupo fosfato específico para una secuencia diana de tipo silvestre, que previene la elongación del producto de PCR (PCR clamping). Para validar y controlar la reacción de qPCR en presencia de ADN genómico humano molde, cada mezcla de reacción CALR incluye cebadores y una sonda para amplificar una secuencia endógena del gen de mantenimiento ABL1. Esta secuencia de control se amplifica mediante una reacción de PCR multiplex en presencia de todo el ADN CALR mutante y silvestre. Todos los componentes necesarios se incluyen en la serie para una detección precisa y sensible de las mutaciones CALR.

Procedimiento

El kit CALR RGQ PCR permite la detección de mutaciones de CALR y la identificación específica de los tipos 1 y 2 en el Rotor-Gene Q 5plex HRM. El primer paso es la extracción de ADN, ya sea con el QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit (manual) o con el QIAsymphony DSP DNA Mini Kit (automatizado en el QIAsymphony SP), seguida de la determinación de la calidad y cantidad del ADN genómico. El segundo paso es la amplificación del ADN genómico mediante PCR en tiempo real. El kit incluye todos los reactivos necesarios para realizar siete reacciones de amplificación por qPCR independientes en la misma serie para la detección de mutaciones de CALR y la identificación de los tipos 1 y 2 en ADN genómico extraído de sangre periférica humana. Simplemente inicie la reacción en el Rotor-Gene Q 5plex HRM utilizando los protocolos optimizados descritos en el manual del kit.

Aplicaciones

El kit CALR RGQ PCR permite la detección sensible y confiable de mutaciones CALR con identificación específica de los tipos 1 y 2. Este kit es solo para uso en investigación.