Qiagen, 73504, Kit RNeasy FFPE (50)

50 columnas de centrifugación RNeasy MinElute, tubos de recolección, proteinasa K, DNasa I sin ARNasa, tampón potenciador de DNasa, tampones sin ARNasa, agua sin ARNasa

Características

- Nuevo método para superar la reticulación de formalina
- Liberación eficiente de ARN sin comprometer la integridad
- Protocolo optimizado que proporciona ARN en solo 85 minutos

Detalles del producto

El kit RNeasy FFPE está especialmente diseñado para purificar ARN total a partir de secciones de tejido fijadas con formalina e incluidas en parafina. Las condiciones especiales de lisis e incubación revierten la modificación del ARN con formaldehído. Además, el tampón de lisis libera eficazmente el ARN de las secciones de tejido, evitando su posterior degradación. El kit también utiliza DNasa y tampón potenciador de DNasa para optimizar la eliminación de la contaminación del ADN genómico. Las columnas de centrifugación RNeasy MinElute permiten la purificación de ARN total con volúmenes de elución de tan solo 10 μl. La purificación se puede automatizar completamente en QIAcube Connect.

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Principio

La fijación de tejidos con formalina produce entrecruzamientos ARN-ARN y ARN-proteína, lo que afecta el rendimiento del ARN en ensayos enzimáticos. Las condiciones de fijación e inclusión también pueden resultar en ácidos nucleicos muy fragmentados en muestras FFPE. El kit RNeasy FFPE utiliza condiciones especiales de lisis e incubación para revertir la modificación del ARN con formaldehído. El tampón de lisis libera eficazmente el ARN de las muestras de tejido FFPE, evitando su posterior degradación. Estas condiciones optimizadas permiten la purificación de todo el ARN utilizable, lo que se traduce en un mayor rendimiento de las muestras FFPE con el kit RNeasy FFPE que con otros métodos.

Procedimiento

El procedimiento RNeasy FFPE se completa en tan solo 85 minutos (véase el diagrama de flujo "Procedimiento RNeasy FFPE"). La lisis de la muestra mediante digestión con proteinasa K requiere solo 15 minutos. Tras la lisis, las muestras se incuban a 80 °C durante 15 minutos. El tratamiento con DNasa elimina eficazmente el ADN genómico, incluyendo pequeños fragmentos. Finalmente, el ARN concentrado se purifica mediante columnas de centrifugación RNeasy MinElute y se eluye en un volumen de 14-30 µl. La purificación se puede automatizar completamente en el QIAcube.

Aplicaciones

El kit RNeasy FFPE aísla todas las moléculas de ARN de más de 70 nucleótidos de muestras FFPE, lo que proporciona fragmentos de ARN utilizables para numerosas aplicaciones posteriores, como la RT-PCR. Sin embargo, el ARN purificado de muestras FFPE está muy fragmentado y no debe utilizarse en aplicaciones posteriores que requieran ARN de longitud completa. Algunas aplicaciones pueden requerir modificaciones para permitir el uso de ARN fragmentado (p. ej., el diseño de amplicones pequeños para RT-PCR). Para la síntesis de ADNc, se recomiendan cebadores aleatorios o específicos de genes en lugar de cebadores oligo-dT.