Qiagen, 74034, Kit RNeasy Plus Micro (50)

Para 50 micropreparaciones: columnas de centrifugación RNeasy MinElute, columnas de centrifugación gDNA Eliminator, tubos de recolección, ARN transportador, agua sin ARNasa y tampones

Características

- Eliminación eficiente de ADNg con columnas o placas eliminadoras de ADNg exclusivas (sin necesidad de DNasa)
- ARN total de alta calidad en minutos utilizando protocolos de extracción rápidos y sencillos
- Aislamiento de ARN sin fenol
- Procesamiento de alto rendimiento en formato de 96 pocillos
- Ideal para aplicaciones sensibles como RT-PCR en tiempo real y RNA-seq

Detalles del producto

Los kits RNeasy Plus son kits de extracción de ARN de QIAGEN de última generación que combinan la purificación de ARN de alta calidad con la eliminación eficaz de ADNg mediante las exclusivas columnas o placas Eliminator de ADNg. Se obtiene ARN total de alta pureza y rendimiento a partir de una amplia gama de células cultivadas y tejidos fáciles de lisar. El kit RNeasy Plus Micro está especialmente diseñado para cantidades limitadas de muestras y aísla hasta 45 µg de ARN total puro. El kit RNeasy Plus Mini purifica hasta 100 µg de ARN total (>200 nt) a partir de una única extracción con una eliminación eficiente de ADNg. Ambos kits se pueden automatizar en QIAcube Connect y las muestras se pueden estabilizar cómodamente utilizando el reactivo tisular RNAprotect o el reactivo tisular Allprotect y se pueden desintegrar eficazmente utilizando un sistema TissueRuptor II, TissueLyser II o LT (disponibles por separado). El kit RNeasy Plus 96 es para la purificación de alto rendimiento de ARN total de células cultivadas en placas de 96 pocillos.

Actuación

La extracción de ARN de células y tejidos con los kits RNeasy Plus Micro y Mini permite obtener ARN reproducibles y altos rendimientos, así como una eliminación eficiente del ADN genómico para aplicaciones sensibles (véanse las figuras “Eliminación eficaz del ADN genómico celular”, “Eliminación eficaz del ADN genómico tisular”, “Altos rendimientos de ARN reproducibles” y “ARN listo para array”). El ARN total con valores RIN de Agilent cercanos a 10 se obtiene rutinariamente a partir de tejidos y células cultivadas.

Los kits RNeasy Plus Micro y Mini también enriquecen el ARNm, ya que excluyen la mayoría de los ARN de <200 nucleótidos (como ARNr y ARNt). Para el aislamiento de ARN total que contiene ARN pequeños (p. ej., miARN) a partir de células cultivadas, existen protocolos adicionales de aislamiento de ARN, descritos en el Manual de RNeasy Plus Micro y como protocolo complementario independiente del kit RNeasy Plus Mini. El kit RNeasy Plus 96 es compatible con una amplia gama de líneas celulares y proporciona purificación de ARN de alta calidad con valores RIN de Agilent cercanos a 10 (véase la figura "ARN de alta calidad"). La eliminación completa del ADN genómico con el kit (véase la figura "Eliminación eficaz del ADN genómico") permite la detección específica de transcripciones en aplicaciones de alta sensibilidad, como el análisis cuantitativo por RT-PCR en tiempo real de dianas de baja abundancia. Además, la purificación confiable de ARN de 102 a 106 células permite la cuantificación mediante RT-PCR en tiempo real en un amplio rango dinámico (ver figura "Purificación confiable de ARN").

Principio

- Fabricación
- Gestión responsable de productos químicos
- Contenido sostenible en productos y materiales de embalaje
- Eliminación del embalaje al final de su vida útil

El procedimiento RNeasy Plus integra la innovadora tecnología de QIAGEN para la unión selectiva de ADN bicatenario con la consolidada tecnología RNeasy. Se garantiza una purificación eficiente de ARN de alta calidad, sin necesidad de digestión adicional con DNasa. El ARN purificado está listo para usar y es ideal para aplicaciones posteriores sensibles a bajas cantidades de contaminación de ADN, como la RT-PCR cuantitativa en tiempo real.

Las células y los tejidos fáciles de lisar se lisan y homogeneizan primero en el tampón RLT Plus, altamente desnaturalizante, que contiene isotiocianato de guanidina. Este tampón inactiva inmediatamente las ARNasas para garantizar el aislamiento del ARN intacto. A continuación, el lisado se pasa a través de una columna de centrifugación gDNA Eliminator o una placa gDNA Eliminator de 96 pocillos que, en combinación con el tampón de alta concentración salina, elimina el ADN genómico de forma selectiva y eficaz. Se añade etanol para proporcionar las condiciones de unión adecuadas para el ARN y la muestra se aplica a una columna de centrifugación RNeasy o a una placa de 96 pocillos. Estas columnas y placas de 96 pocillos especializadas contienen una membrana de sílice que se une específicamente al ARN de las células lisadas. Para tejidos grasos y difíciles de lisar, se recomiendan los kits universales RNeasy Plus. Para el aislamiento del ARN total, incluido el miARN, de otros tipos de muestras, recomendamos los kits miRNeasy.

El minikit QIAwave RNA Plus es una versión más ecológica de nuestro minikit RNeasy Plus estándar. Reduce el uso de plástico y cartón hasta en un 47 % y un 42 %, respectivamente, e incorpora tubos de desecho fabricados con plástico 100 % reciclado posconsumo que pueden reutilizarse durante el procedimiento. Los tampones QIAwave se suministran como concentrados, lo que reduce el uso de plástico hasta en un 90 % por frasco. A pesar de las diferencias visuales, el minikit QIAwave sigue siendo fácil de usar, con una composición química y un rendimiento idénticos a los del kit estándar.

En colaboración con My Green Lab, también evaluamos el impacto ambiental del RNeasy Plus Mini Kit (50/250) y del QIAwave RNA Plus Mini Kit (50/250). Las etiquetas de factor de impacto ambiental ACT (Responsabilidad, Consistencia y Transparencia) de My Green Lab están diseñadas para evaluar y calificar los productos según diversos criterios de sostenibilidad. Estos incluyen:

Los productos se puntúan del 1 al 10, excepto el consumo de energía y agua, que se puntúan con 1 punto por kWh o galón, respectivamente. Una puntuación baja significa un menor impacto ambiental (véanse las figuras "Etiqueta de factor de impacto ambiental ACT de los minikits RNA Plus: EE. UU. (50/250), UE (50/250) y Reino Unido (50/250)").

Procedimiento

El kit RNeasy Plus Micro purifica ARN total de hasta 5 x 10⁻¹ células o 5 mg de tejido, y el kit RNeasy Plus Mini aísla ARN total de hasta 10⁻¹ células o 30 mg de tejido. Un flujo de trabajo breve permite el aislamiento de ARN con eliminación de ADN genómico en menos de 25 minutos (véase el diagrama de flujo del procedimiento RNeasy Plus). Las muestras se lisan y homogeneizan primero. El lisado se pasa a través de una columna de centrifugación gDNA Eliminator, se añade etanol al flujo y la muestra se aplica a una columna de centrifugación RNeasy. El ARN se une a la membrana y los contaminantes se eliminan por lavado. El ARN de alta calidad se eluye en tan solo 14 µl de agua con el kit RNeasy Plus Micro o 30 µl de agua con el kit RNeasy Plus Mini.

Existen diferentes protocolos para distintos materiales de partida. Estos difieren principalmente en la lisis y homogeneización de la muestra. Una vez aplicada la muestra a la columna de centrifugación Eliminator de ADNg, los protocolos son similares. El procedimiento proporciona un enriquecimiento del ARNm, ya que se excluyen la mayoría de los ARN de <200 nucleótidos (como los ARNr y los ARNt).

Al descomponer y homogeneizar tejidos en el tampón RLT Plus (incluido en el minikit RNeasy Plus), puede producirse una formación excesiva de espuma. Esta formación se reduce considerablemente añadiendo el reactivo DX (incluido por separado) al tampón RLT Plus antes de iniciar la descomposición y homogeneización. El reactivo DX se ha probado cuidadosamente con el kit y no afecta la pureza del reactivo A ni las aplicaciones posteriores.

La purificación de ARN de alto rendimiento se logra mediante el uso de placas RNeasy 96. Antes de aplicarlas a la placa RNeasy 96, los lisados ​​celulares se pasan primero a través de una placa gDNA Eliminator 96 (véase la figura "Procedimiento RNeasy Plus 96"). Las placas gDNA Eliminator 96 se procesan fácilmente con una centrífuga (Centrífuga 4-16). La purificación de ARN con placas RNeasy 96 es manual y consta de tres sencillos pasos: unión, lavado y elución. Las placas se procesan rápida y fácilmente utilizando una centrífuga (Centrífuga 4-16 y Rotor de Placas 2 x 96) o una combinación de vacío (QIAvac 96) y centrífuga. Se pueden utilizar hasta 2 x 10⁻¹ células como material de partida al procesar las placas con una centrífuga, mientras que se puede utilizar hasta 1 x 10⁻¹ células al procesar las placas con vacío y centrífuga. El procedimiento proporciona un enriquecimiento del ARNm, ya que se excluyen la mayoría de los ARN de menos de 200 nucleótidos (como los ARNr y los ARNt). El procedimiento RNeasy Plus puede modificarse para permitir la purificación de ARN total que contiene ARN pequeños, como los miARN, a partir de células cultivadas.

Los protocolos estándar de RNeasy Plus Mini también se pueden ejecutar con el sistema TRACKMAN Connected, junto con las pipetas PIPETMAN M Connected, ambas de Gilson. El sistema TRACKMAN Connected guía a los investigadores a través de los protocolos de RNeasy Plus Mini, a la vez que ajusta automáticamente la configuración de las pipetas PIPETMAN M Connected con Bluetooth. Cada paso de la ejecución del protocolo se registra para agilizar la generación de informes, generando un informe completo de la ejecución. Descargue más información.

Aplicaciones

- Criocortes microdiseccionados con láser
- Aspiraciones con aguja fina

- Descubrimiento de fármacos
- Investigación biomédica

El ARN purificado con los kits RNeasy Plus es ideal para aplicaciones posteriores sensibles a bajas concentraciones de ADN, como la secuenciación de ARN y la RT-PCR cuantitativa en tiempo real. El ARN purificado también puede utilizarse en otras aplicaciones.

El kit RNeasy Plus Micro es adecuado para muestras pequeñas, incluidas:

La facilidad con la que se purifica el ARN en formato de 96 pocillos hace que el kit RNeasy Plus 96 sea adecuado para el análisis de expresión genética de alto rendimiento en áreas como: