Qiagen, 74704, Minikit de tejido fibroso RNeasy (50)

50 minicolumnas de centrifugación RNeasy, tubos de recolección (1,5 ml y 2 ml), proteinasa K, DNasa I sin ARNasa, reactivos y tampones sin ARNasa

Características

- Protocolos optimizados para tejidos fibrosos
- Altos rendimientos de ARN total
- ARN de alta calidad para todas las aplicaciones posteriores
- Eliminación de ADN genómico mediante DNasa I

Detalles del producto

El minikit RNeasy para tejido fibroso incluye proteinasa K para la eliminación de proteínas abundantes en muestras de tejido ricas en fibra y columnas de centrifugación RNeasy para la purificación de hasta 100 µg de ARN de alta calidad. El kit se puede automatizar en QIAcube Connect. Las muestras de tejido fibroso se pueden estabilizar fácilmente con el reactivo tisular RNAprotect o el reactivo tisular Allprotect, y se pueden descomponer eficazmente con un sistema TissueRuptor o TissueLyser. Para muestras más grandes, también está disponible el minikit RNeasy para tejido fibroso (capacidad de unión de 1 mg de ARN en la columna de centrifugación).

Actuación

Tejido de rata (10 mg): Rendimiento de ARN* (µg) con el minikit de tejido fibroso RNeasy
Corazón: 8.2
Músculo: 5.3
Piel: 6.0
Esófago: 13,9

Los kits de tejido fibroso RNeasy están optimizados para su uso con tejidos ricos en fibra. El procedimiento RNeasy para tejido fibroso garantiza un aislamiento sencillo y eficiente de ARN total de alta calidad (véase la figura "ARN de alta calidad de tejidos ricos en fibra"), ideal para cualquier aplicación posterior, incluyendo análisis de matrices y RT-PCR en tiempo real (véanse las figuras "Análisis de la expresión génica en tiempo real en diversos tejidos fibrosos" y "Análisis LightCycler de ARN de alta calidad de corazón"). El minikit RNeasy para tejido fibroso garantiza una mayor producción de ARN de tejido rico en fibra en comparación con otros métodos basados ​​en sílice (véase la tabla).

Principio

La tecnología RNeasy simplifica el aislamiento total de ARN combinando la rigurosidad de la lisis con isotiocianato de guanidina con la velocidad y pureza de la purificación con membrana de sílice. Los kits de tejido fibroso RNeasy están optimizados para su uso con tejidos ricos en fibra, como músculo esquelético, corazón y aorta, tejidos difíciles de lisar debido a la abundancia de proteínas contráctiles, tejido conectivo y colágeno. El protocolo RNeasy para tejido fibroso integra pasos de digestión con proteinasa K y DNasa sin RNasa durante el aislamiento de ARN para descomponer las proteínas y el ADN genómico y obtener una mayor producción de ARN total de alta calidad. Dado que los procedimientos RNeasy enriquecen con ARNm y otras especies de ARN de más de 200 nucleótidos, la producción total de ARN no incluye ARNr 5S, ARNt ni otros ARN de bajo peso molecular, que representan entre el 15 % y el 20 % del ARN celular total.

Procedimiento

Muestras de tejido fibroso de 0,5 a 30 mg se lisan en un tampón de isotiocianato de guanidina. Tras la dilución del lisado, la muestra se trata con proteinasa K. Los residuos se sedimentan mediante centrifugación. A continuación, se añade etanol al lisado clarificado y el ARN se une a la membrana de sílice RNeasy. Los restos de ADN que puedan copurificarse se eliminan mediante un tratamiento con DNasa en la columna de centrifugación RNeasy. La DNasa y cualquier contaminante se eliminan por lavado, y se eluyen hasta 100 µg de ARN total de alta calidad en 30-100 µl de agua sin RNasa (véase la figura "Procedimiento RNeasy Fibrous Tissue Mini").

Aplicaciones

Los kits de tejido fibroso RNeasy proporcionan ARN total de alta calidad a partir de muestras ricas en fibras que es adecuado para cualquier aplicación posterior, incluido el análisis de matrices y la RT-PCR en tiempo real.