Qiagen, 74881, Kit de tejido universal RNeasy 96 (4)

Para preparaciones de ARN total de 4 x 96: 4 placas RNeasy 96, microtubos de recolección, microtubos de elución CL, tapas, bloques S, hojas de cinta AirPore, reactivo de lisis QIAzol, reactivos y tampones sin ARNasa

Características

- Altos rendimientos de ARN total de todos los tejidos.
- Eliminación rápida no enzimática de ADN genómico
- Lisis optimizada de QIAzol y purificación de RNeasy 96
- ARN puro de alta calidad sin contaminación por fenol
- ARN de alto rendimiento para todas las aplicaciones posteriores

Detalles del producto

El minikit universal RNeasy Plus combina una purificación de ARN rápida y práctica con la eliminación eficaz del ADN genómico. Sus protocolos optimizados permiten la purificación de ARN de alta calidad de cualquier tipo de tejido, incluso de los más difíciles de lisar. El kit incluye el reactivo de lisis QIAzol para la lisis de tejido graso y otros tipos de tejido, y columnas de centrifugación RNeasy para la purificación de ARN de alta calidad. El minikit universal RNeasy Plus se puede automatizar en QIAcube Connect.

El kit universal para tejidos RNeasy 96 permite la purificación total de ARN en formato de 96 pocillos a partir de cualquier tejido. Los tejidos se lisan y homogeneizan eficazmente con el reactivo de lisis QIAzol, y el ARN de alta calidad se purifica utilizando placas RNeasy 96 con membrana de sílice. La purificación manual se realiza con la centrífuga QIAGEN 4-16KS y, opcionalmente, con el colector de vacío QIAvac 96. La purificación automatizada con el kit RNeasy 96 Universal Tissue 8000 se realiza en el sistema universal BioRobot. Las muestras de tejido se pueden estabilizar fácilmente con el reactivo tisular Allprotect y se pueden desintegrar eficazmente con el TissueLyser II. Los tejidos no grasos se pueden estabilizar con el reactivo tisular RNAprotect.

Actuación

Tejido de ratón/rata (10 mg): Rendimiento de ARN total ((µg)
Tejido adiposo: 0,5–2,5
Cerebro: 5–20
Corazón: 5–25
Intestino: 10–60
Riñón: 5–40
Hígado: 15–80
Pulmón: 5–15
Músculo: 5–35
Piel: 2–5
Bazo: 15–100

Tejido: Rendimiento de ARN* (µg por 10 mg de tejido)
Riñón: 5–40
Hígado: 15–80
Pulmón: 5–15
Corazón: 5–25
Músculo: 5–35
Cerebro: 5–20
Tejido adiposo: 0,5–2,5
Bazo: 15–100
Intestino: 10–60
Piel: 2–5

El procedimiento RNeasy Plus Universal permite obtener altos rendimientos reproducibles de ARN de cualquier tipo de tejido, incluyendo tejido adiposo y tejido de difícil lisis (véase la tabla «Rendimiento típico de ARN total con el minikit RNeasy Plus Universal»). Los rendimientos pueden variar según factores como la especie y la etapa de desarrollo, especialmente en el tejido adiposo.

El análisis de ARN purificado mediante RT-PCR en tiempo real y en el sistema QIAxcel demuestra la obtención de ARN de alta calidad con buena integridad (véase la figura "ARN de alta calidad"). La solución eliminadora de gDNA y las tecnologías RNeasy eliminan eficazmente la mayor parte de la contaminación del ADN genómico sin tratamiento con DNasa (véase la figura "Eliminación eficaz del ADN genómico").

En comparación con los procedimientos estándar con membrana de sílice, el sistema RNeasy 96 proporciona mayores rendimientos de ARN total para todos los tipos de tejido (consulte la tabla “Rendimientos típicos de ARN total utilizando el kit de tejido universal RNeasy 96”).

Rendimientos típicos de ARN total utilizando el kit de tejido universal RNeasy 96

Se puede aislar ARN de alta calidad a partir de tejidos conservados mediante congelación o estabilización con RNAprotect a temperatura ambiente (véase la figura "ARN total de alta calidad de hígado y tejido muscular de rata"). El ARN intacto purificado a partir de tejidos fibrosos y grasos difíciles de lisar es adecuado para aplicaciones posteriores (véanse las figuras "ARN de alta calidad de piel/tejido adiposo/hepático/intestinal" y "Análisis en tiempo real de ARN de alta calidad de cerebro de rata").

Principio

El procedimiento RNeasy Plus Universal Mini permite la purificación de ARN de cualquier tipo de tejido, incluyendo tejidos grasos o de difícil lisis. El kit RNeasy Plus Universal Mini integra la lisis de muestras con fenol/guanidina y la purificación del ARN total mediante membrana de sílice. El reactivo de lisis QIAzol, incluido en los kits, es una solución monofásica de fenol y tiocianato de guanidina, diseñada para facilitar la lisis de todo tipo de tejidos e inhibir las ARNasas. La alta eficiencia de la lisis y la posterior eliminación de contaminantes mediante extracción en fase orgánica permiten el uso de mayores cantidades de tejido con las columnas de centrifugación RNeasy. La solución gDNA Eliminator elimina eficazmente la contaminación del ADN genómico y mejora significativamente la separación del ADN en la interfase.

El procedimiento RNeasy 96 Universal Tissue permite la purificación de ARN de alto rendimiento de cualquier muestra de tejido animal o humano. En comparación con los procedimientos estándar con membrana de sílice, el kit RNeasy 96 Universal Tissue ofrece una mayor producción de ARN total para todo tipo de tejido. El procedimiento RNeasy enriquece ARN de más de 200 bases, lo que proporciona una producción de ARN total que excluye ARNr 5.8S, ARNt y otros ARN de bajo peso molecular, que representan entre el 15 % y el 20 % del ARN celular total.

Procedimiento

El procedimiento RNeasy Plus Universal es fácil de seguir y, en comparación con el uso de fenol/cloroformo para extraer ARN total con un procedimiento de limpieza posterior, es mucho más rápido y eficiente, con una mayor pureza y rendimiento del ARN (véase el diagrama de flujo "Procedimiento RNeasy Plus Universal Mini"). El ARN total se purifica a partir de hasta 50 mg de tejido con el kit RNeasy Plus Universal Mini.

Las muestras de tejido se homogeneizan en el reactivo de lisis QIAzol utilizando TissueRuptor II, TissueLyser LT o TissueLyser II. Tras añadir la solución eliminadora de ADNg y cloroformo, el homogeneizado se separa en fases acuosa y orgánica mediante centrifugación. Se recoge la fase acuosa superior con ARN, se mezcla con etanol y se purifica el ARN utilizando columnas de centrifugación RNeasy. El ARN total se une a la membrana de la columna de centrifugación y el fenol y otros contaminantes se eliminan eficazmente. El ARN de alta calidad se eluye en agua sin ARNasas.

El procedimiento proporciona un enriquecimiento del ARNm, ya que se excluyen la mayoría de los ARN de menos de 200 nucleótidos (como los ARNr y los ARNt). El procedimiento RNeasy Plus Universal puede modificarse para permitir la purificación de ARN total que contiene ARN pequeños, como los miARN, a partir de células cultivadas.

El procedimiento optimizado RNeasy 96 Universal Tissue integra el procesamiento con TissueLyser/QIAzol y la purificación con RNeasy 96 en un protocolo fácil de seguir (véase el diagrama de flujo "Procedimiento RNeasy 96 Universal Tissue"). La disrupción eficiente de alto rendimiento con TissueLyser II proporciona disrupción y homogeneización paralelas, con lisis de hasta 192 muestras en el reactivo de lisis QIAzol. Los pasos del protocolo se realizan manualmente con el sistema de centrifugación de placas de 96 pocillos QIAGEN, con el uso opcional del colector de vacío QIAvac 96.

Aplicaciones

El ARN purificado con los kits universales RNeasy Plus es ideal para aplicaciones posteriores sensibles a bajas concentraciones de contaminación de ADN, como la secuenciación de ARN y la RT-PCR cuantitativa en tiempo real. El ARN purificado también puede utilizarse en otras aplicaciones.

La combinación de las tecnologías QIAzol y RNeasy produce ARN de alta pureza sin arrastre de fenol. El ARN purificado con el kit de tejido universal RNeasy 96 es apto para todas las aplicaciones posteriores, como secuenciación de ARN, RT-PCR en tiempo real y análisis de matrices.