Product Description
Para la estabilización del ARN en muestras de tejido de 50 x 150 mg: 50 tubos con tapa de rosca que contienen 1,5 ml de reactivo tisular RNAprotect cada uno
Características
- Estabilización inmediata del ARN y protección del ARN.
- Manejo cómodo y seguro a temperatura ambiente.
- Fácil recogida y almacenamiento de tejidos en tubos resellables.
- Estabilización de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas
- No es necesario retirar el medio de las células clasificadas o cultivadas
Detalles del producto
Los reactivos y tubos RNAprotect proporcionan la inactivación inmediata de la ARNasa y la estabilización del ARN en tejidos, cultivos de bacterias grampositivas y gramnegativas, y células clasificadas o cultivadas para preservar el perfil de expresión génica y permitir la purificación reproducible de ARN de alta calidad. Las muestras se estabilizan a temperatura ambiente antes de los procedimientos de aislamiento del ARN.
Actuación
El reactivo tisular RNAprotect garantiza la inactivación inmediata de la ARNasa y estabiliza y protege el patrón de expresión del ARN de las muestras durante la recolección y el almacenamiento (véase la figura "El reactivo RNAprotect previene la degradación del ARNm en los tejidos"). La protección inmediata con la tecnología RNAprotect garantiza que los análisis posteriores reflejen fielmente el perfil de expresión de los tejidos intactos. Las muestras pueden archivarse sin riesgo de degradación del ARN, incluso después de múltiples ciclos de congelación-descongelación (véanse las figuras "ARN estable en tejidos: diferentes temperaturas y ciclos de congelación-descongelación" y "Los tubos tisulares RNAprotect previenen los cambios del ARN en los tejidos").
El reactivo celular RNAprotect previene la inducción de la expresión genética en células tratadas y preserva y estabiliza los niveles de transcripción durante el almacenamiento de muestras de células (ver figuras "Inhibición efectiva de la inducción de la expresión de c-fos por PMA" y "Cuantificación más confiable de la transcripción de CD83").
El reactivo RNAprotect Bacteria es apto para una amplia gama de especies bacterianas, tanto grampositivas (p. ej., Staphylococcus aureus y Mycobacterium avium) como gramnegativas (p. ej., Escherichia coli y Salmonella typhimurium), y previene la degradación del ARN (véanse las figuras «El reactivo RNAprotect Bacteria previene la degradación del ARNm» y «Análisis GeneChip»). Las bacterias pueden cultivarse en un medio mínimo o complejo antes del aislamiento del ARN.
Análisis GeneChip. El ARN purificado RNeasy a partir de muestras estabilizadas con RNAprotect almacenadas en una amplia variedad de condiciones es ideal para procesos posteriores como Northern blotting y RT-PCR.
Principio
Una vez extraída una muestra biológica, su ARN se vuelve extremadamente inestable. Los reactivos y tubos RNAprotect permiten la inactivación inmediata de la ARNasa, la estabilización del ARN y la preservación de su patrón de expresión. Además, se previene la inducción o la regulación negativa de genes provocada por la manipulación de la muestra, lo que permite un análisis preciso de la expresión génica. Esto es especialmente importante para los perfiles de expresión bacteriana. La degradación enzimática del ARN provoca la reducción o pérdida de muchos transcritos, ya que las moléculas de ARNm bacterianas tienen vidas medias muy cortas, de tan solo unos minutos.
El reactivo tisular RNAprotect penetra rápidamente en los tejidos, lo que resulta en la estabilización inmediata del ARN. El reactivo celular RNAprotect proporciona estabilización inmediata del ARN en células clasificadas o cultivadas. Las células se estabilizan a temperatura ambiente y pueden almacenarse o transportarse a temperatura ambiente antes de la purificación del ARN.
Procedimiento
Para la protección del ARN y el almacenamiento de muestras, las muestras de tejido se sumergen en un volumen adecuado de reactivo tisular RNAprotect inmediatamente después de su recolección. Los tubos tisulares RNAprotect proporcionan volúmenes premedidos de reactivo tisular RNAprotect en tubos resellables para facilitar su manipulación y almacenamiento. El reactivo conserva el ARN hasta 1 día a 37 °C, 7 días a 18-25 °C o 4 semanas a 2-8 °C, lo que permite el procesamiento, transporte, almacenamiento y envío de muestras sin nitrógeno líquido ni hielo seco. Como alternativa, las muestras también pueden almacenarse a –20 °C o –80 °C para su almacenamiento.
El reactivo celular RNAprotect estabiliza inmediatamente el perfil de expresión génica en las células. Con otras tecnologías, es necesario lavar o procesar las células (p. ej., tratamiento con tripsina) antes de añadir un reactivo de estabilización de ARN. Los cambios de expresión que puedan producirse durante el lavado o el procesamiento se eliminan añadiendo el reactivo celular RNAprotect directamente a las células en medio de cultivo o tampón. La estabilización instantánea del ARN con el reactivo celular RNAprotect también puede extenderse a células sedimentadas que no se encuentran en medio ni en solución de almacenamiento. La cantidad de material de partida no debe superar 1 x 10⁻⁴ células.
Para muestras bacterianas, se añaden dos volúmenes del reactivo RNAprotect Bacteria directamente a un volumen de cultivo bacteriano antes del aislamiento del ARN, lo que proporciona una estabilización inmediata del ARN. Esta estabilización permite una lisis bacteriana eficiente mediante diversos protocolos: lisis enzimática, disrupción mecánica o una combinación de ambos. QIAGEN recomienda el TissueLyser para una disrupción mecánica eficiente.
Aplicaciones
- Purificación total de ARN
- purificación de miRNA
- purificación de miRNA
El ARN estabilizado en reactivos y tubos RNAprotect se puede utilizar para:
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