Qiagen, 76204, tampón XBP (250 ml)

250 ml de tampón de unión

Características

- Aislar exosomas intactos y otras vesículas extracelulares.
- Adecuado para pruebas funcionales y análisis físicos y bioquímicos.
- Purifica exosomas y otras vesículas extracelulares en 25 minutos
- Procesar múltiples muestras en paralelo utilizando un procedimiento simple de columna de centrifugación
- Úselo con hasta 4 ml de plasma o suero o 32 ml de sobrenadante de cultivo celular.
- Adecuado para la caracterización de proteínas compatible con MISEV

Actuación

El protocolo exoEasy para la purificación de exosomas y otras vesículas extracelulares no solo es más rápido que la ultracentrifugación, sino que también produce una preparación más limpia. La microscopía electrónica de barrido muestra que, si bien ambas técnicas producen vesículas intactas del tamaño esperado, la preparación obtenida mediante ultracentrifugación también contiene muchas estructuras más pequeñas que no se ajustan al tamaño ni la forma esperados para las VE (véase la figura «Las vesículas intactas se eluyen de la membrana exoEasy con mayor pureza en comparación con la ultracentrifugación»).

También se pueden observar vesículas esféricas, completamente intactas, de diferentes tamaños, entre aproximadamente 50 y 300 nm de diámetro, mediante criomicroscopía electrónica (véase la figura "Visualización de VE aisladas con el kit exoEasy mediante criomicroscopía electrónica"). Las vesículas aisladas son completamente funcionales y pueden utilizarse para diversas aplicaciones posteriores, incluido el cultivo celular (véase la figura "Las vesículas extracelulares aisladas con el kit exoEasy son absorbidas eficientemente por las células diana (datos del cliente)"). La calidad y la cantidad de las vesículas eluidas se pueden determinar mediante diversos métodos, como la microscopía electrónica, la caracterización física (p. ej., análisis de seguimiento de nanopartículas [NTA] o detección de pulsos resistivos sintonizables [TRPS]) y el análisis de los componentes moleculares de las vesículas, como proteínas, ácidos nucleicos o lípidos. Dado que las técnicas de conteo de partículas como NTA o TRPS no distinguen las vesículas de otras partículas, los conteos de partículas realizados en fluidos biológicos no procesados ​​o preparaciones crudas que aún contienen otras partículas (por ejemplo, complejos de proteínas) pueden sobreestimar enormemente la cantidad de vesículas presentes.

Para estandarizar los protocolos y los informes en el campo de las VE, la Sociedad Internacional de Exosomas ha desarrollado las directrices de Información Mínima para el Estudio de Vesículas Extracelulares (MISEV). Estas directrices proporcionan ejemplos de marcadores proteicos enriquecidos con VE que pueden utilizarse para caracterizarlas. Sin embargo, analizar la expresión proteica en VE intactas puede ser complicado debido a la cantidad limitada de material y a los bajos niveles de expresión de muchas proteínas de VE.

En colaboración con ProteinSimple (una marca de Bio-Techne), QIAGEN ha desarrollado un flujo de trabajo estandarizado para la caracterización de proteínas de EV. Este nuevo flujo de trabajo combina un método sencillo para aislar EV con la separación automatizada de proteínas y la inmunodetección de las proteínas recomendadas por MISEV. Tras el aislamiento con el kit exoEasy Maxi, la expresión proteica de EV intactas se puede caracterizar mediante la técnica Western Simple de ProteinSimple. Simple Western es una plataforma de Western blot para la separación automatizada de proteínas y la inmunodetección. Las señales de proteínas potencialmente contaminantes, como APOA1, se eliminan eficazmente durante el aislamiento. (Véase la figura "Análisis de proteínas de EV en fracciones plasmáticas mediante la técnica Western blot automatizada Simple Western").

Aplicaciones

- Caracterización física (p. ej., NTA, TRPS)
- Microscopía electrónica
- Aislamiento y análisis de ADN, ARN*, proteínas, lípidos y otros componentes
- Citometría de flujo
- Marcaje basado en anticuerpos o colorantes fluorescentes
- Captación por las células receptoras