Qiagen, 766134, Kit de ARN/miARN tisular PAXgene (50) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para 50 preparaciones de ARN: columnas de centrifugación PAXgene RNA MinElute, columnas de centrifugación PAXgene Shredder, tubos de procesamiento, tubos de microcentrífuga, ARN transportador, DNasa sin ARNasa y tampones sin ARNasa; para usar junto con los contenedores de tejido PAXgene

Características

- Fijación, estabilización y purificación integradas.
- Purificación efectiva de miRNA y ARN total
- miRNA de alta calidad procedente de tejidos
- Morfología tisular preservada

Detalles del producto

Las muestras de tejido fijadas y almacenadas en los contenedores de tejido PAXgene pueden incluirse en parafina y utilizarse para estudios patológicos, así como para la posterior purificación de miARN, ARN o ADN. El kit de miARN de tejido PAXgene permite la purificación de ARN total, incluyendo ARN de aproximadamente 18 nucleótidos, a partir de tejidos fijados y estabilizados en los contenedores de tejido PAXgene. La purificación se realiza mediante tecnología de purificación de ARN basada en sílice en formato de columna de centrifugación. Junto con los contenedores, el kit proporciona una solución preanalítica completa que abarca desde la recolección, fijación y estabilización hasta la purificación de miARN de alta calidad y ARN total para análisis molecular.

Actuación

Juntos, el contenedor y el kit proporcionan una solución preanalítica completa para la recolección, fijación y estabilización de tejido, y para la purificación de ARN de alta calidad, incluido miARN, para análisis molecular (ver figura "Purificación eficiente de miARN de tejido fijado almacenado en contenedores de tejido PAXgene").

El ARN total purificado con el kit PAXgene Tissue miRNA es altamente puro. Se minimiza la contaminación del ADN genómico y el ARN purificado está listo para usarse en aplicaciones posteriores sin inhibición detectable de la PCR. Todas las moléculas de ARN de más de 18 nucleótidos se purifican.

Principio

Los métodos actuales de fijación de tejidos utilizados en la histología tradicional tienen una utilidad limitada para el análisis molecular. Los fijadores que contienen formaldehído reticulan biomoléculas y modifican ácidos nucleicos y proteínas. Durante la fijación, el almacenamiento y el procesamiento de tejidos, las reticulaciones provocan la degradación de los ácidos nucleicos. Dado que las reticulaciones no pueden eliminarse por completo, las modificaciones químicas resultantes pueden causar inhibición en aplicaciones posteriores sensibles, como la PCR cuantitativa o la RT-PCR. Para permitir el análisis de patología molecular y tradicional a partir de la misma muestra, se necesita un método que estabilice el contenido molecular y preserve la morfología.

PreAnalytiX ha desarrollado el Sistema de Tejidos PAXgene para satisfacer estas necesidades. El sistema consta de un dispositivo de recolección de tejidos (el Contenedor de Tejidos PAXgene para la recolección, estabilización, almacenamiento y transporte de muestras de tejido humano) y kits para la purificación de miARN, ARN total o ADN. Los Contenedores de Tejidos PAXgene proporcionan fijación de tejidos para estudios histopatológicos y permiten la purificación de ácidos nucleicos de alta calidad de la misma muestra para análisis molecular. El método de fijación y estabilización preserva la morfología tisular y la integridad de los ácidos nucleicos sin la reticulación destructiva ni la degradación que se observan en los tejidos fijados con formalina.

Procedimiento

Los contenedores de tejido PAXgene son contenedores de doble cámara precargados con dos reactivos. El fijador de tejido PAXgene penetra y fija rápidamente el tejido. Tras la fijación, el tejido se retira del fijador de tejido PAXgene y se transfiere al estabilizador de tejido PAXgene en la segunda cámara del mismo contenedor. Al almacenar el tejido en el estabilizador de tejido PAXgene, los ácidos nucleicos y la morfología de la muestra se mantienen estables durante un mínimo de 3 y un máximo de 7 días a temperatura ambiente, o hasta 8 semanas a 2-8 °C, según el tipo de tejido. El almacenamiento a una temperatura de –15 a –30 °C también es posible durante al menos 26 meses sin afectar negativamente la morfología del tejido ni la integridad de los ácidos nucleicos.

Las muestras estabilizadas pueden incluirse en parafina para estudios histológicos. Los ácidos nucleicos pueden aislarse de las muestras fijadas en tejido e incluidas en parafina (PFPE) de PAXgene, antes o después de incluirlas en parafina.

El kit PAXgene Tissue miRNA proporciona tres protocolos para la purificación de ARN total de tejido fijado y estabilizado en contenedores PAXgene Tissue, incluyendo moléculas de ARN menores de 200 nucleótidos, como ARNr 5.8S, ARNr 5S, ARNt y miRNA. Las condiciones optimizadas de unión y lavado garantizan la purificación de moléculas de ARN de hasta 18 nucleótidos. Como requisito previo, el tejido debe estar fijado y estabilizado en contenedores PAXgene Tissue.

La disrupción y homogeneización de la muestra de tejido se realiza en el tampón de unión Buffer TM1. Tras una centrifugación para eliminar los restos celulares, se añade etanol al lisado para proporcionar las condiciones de unión adecuadas para todas las moléculas de ARN de 18 nucleótidos o más. A continuación, la muestra se aplica a una columna de centrifugación PAXgene RNA MinElute, donde el ARN total se une a la membrana y los contaminantes se eliminan eficazmente. Entre el primer y el segundo lavado, la membrana se trata con DNasa I para eliminar trazas de ADN unido. Tras el lavado, el ARN, incluido el miARN, se eluye en un tampón de elución bajo en sal y se desnaturaliza mediante calor (véase la figura "Procedimiento de miARN tisular PAXgene").

Las especificaciones para las condiciones de fijación y almacenamiento de PAXgene Tissue Fix y PAXgene Tissue Stabilizer se determinaron utilizando tejidos animales.

Aplicaciones

- Análisis de transferencia Northern
- RT-PCR y RT-PCR cuantitativa en tiempo real
- Análisis de microarrays

El miRNA purificado y el ARN total están listos para usarse en una amplia gama de aplicaciones posteriores, que incluyen: