Qiagen, 767134, Kit de ADN tisular PAXgene (50)

Para 50 preparaciones de ADN: columnas de centrifugación PAXgene DNA Mini, tubos de procesamiento, tubos de microcentrífuga, ARN transportador y tampones; para usar junto con los contenedores de tejido PAXgene

Características

- Fijación, estabilización y purificación integradas.
- ADN de alta calidad procedente de tejidos
- Morfología tisular preservada
- Purificación automatizada en el QIAcube

Detalles del producto

Las muestras de tejido fijadas y almacenadas en los contenedores de tejido PAXgene pueden incluirse en parafina y utilizarse para estudios patológicos, así como para la posterior purificación de ADN, ARN o miARN. El kit de ADN tisular PAXgene permite la purificación de ADN de tejidos fijados y estabilizados en los contenedores de tejido PAXgene. La purificación se realiza mediante tecnología de purificación de ADN basada en sílice en formato de columna de centrifugación. Junto con los contenedores, el kit proporciona una solución preanalítica completa que abarca desde la recolección, fijación y estabilización hasta la purificación de ADN de alta calidad para análisis molecular. Los procedimientos pueden automatizarse completamente en QIAcube Connect.

Actuación

El ADN total purificado con el kit de ADN tisular PAXgene es altamente puro. El ADN presenta ratios A₂₄/A₂₄ de 1,7 a 1,9, y los análisis de absorbancia muestran un pico simétrico a 260 nm, lo que confirma la alta pureza del ADN genómico. La contaminación se minimiza y el ADN purificado está listo para su uso en aplicaciones posteriores sin inhibición detectable de la PCR. Juntos, el contenedor y el kit proporcionan una solución preanalítica completa para la recolección, fijación y estabilización de tejido, así como para la purificación de ADN de alta calidad para análisis molecular (véase la figura "ADN de alta calidad de diferentes tipos de tejido fijado y estabilizado en los contenedores de tejido PAXgene").

Principio

Los métodos actuales de fijación de tejidos utilizados en la histología tradicional tienen una utilidad limitada para el análisis molecular. Los fijadores que contienen formaldehído reticulan biomoléculas y modifican ácidos nucleicos y proteínas. Durante la fijación, el almacenamiento y el procesamiento de tejidos, las reticulaciones provocan la degradación de los ácidos nucleicos. Dado que las reticulaciones no pueden eliminarse por completo, las modificaciones químicas resultantes pueden causar inhibición en aplicaciones posteriores sensibles, como la PCR cuantitativa o la RT-PCR. Para permitir el análisis de patología molecular y tradicional a partir de la misma muestra, se necesita un método que estabilice el contenido molecular y preserve la morfología.

PreAnalytiX ha desarrollado el Sistema de Tejidos PAXgene para satisfacer estas necesidades. El sistema consta de un dispositivo de recolección de tejidos (el Contenedor de Tejidos PAXgene para la recolección, estabilización, almacenamiento y transporte de muestras de tejido humano) y kits para la purificación de ADN, ARN total o miARN. Los Contenedores de Tejidos PAXgene proporcionan fijación de tejidos para estudios histopatológicos y permiten la purificación de ácidos nucleicos de alta calidad de la misma muestra para análisis molecular. El método de fijación y estabilización preserva la morfología tisular y la integridad de los ácidos nucleicos sin la reticulación destructiva ni la degradación que se observan en los tejidos fijados con formalina.

Para el aislamiento de ADN genómico, el sistema requiere el uso de contenedores de tejido PAXgene para la recolección y estabilización de tejidos, seguido del aislamiento y purificación de ADN utilizando el kit de ADN de tejido PAXgene.

Procedimiento

Los contenedores de tejido PAXgene son contenedores de doble cámara precargados con dos reactivos. El fijador de tejido PAXgene penetra y fija rápidamente el tejido. Tras la fijación, el tejido se retira del fijador de tejido PAXgene y se transfiere al estabilizador de tejido PAXgene en la segunda cámara del mismo contenedor. Al almacenar el tejido en el estabilizador de tejido PAXgene, los ácidos nucleicos y la morfología de la muestra se mantienen estables durante un mínimo de 3 y un máximo de 7 días a temperatura ambiente, o hasta 8 semanas a 2-8 °C, según el tipo de tejido. El almacenamiento a una temperatura de –15 a –30 °C también es posible durante al menos 26 meses sin afectar negativamente la morfología del tejido ni la integridad de los ácidos nucleicos.

Las muestras estabilizadas pueden incluirse en parafina para estudios histológicos. Los ácidos nucleicos pueden aislarse de las muestras fijadas en tejido e incluidas en parafina (PFPE) de PAXgene, antes o después de incluirlas en parafina.

El kit de ADN de tejido PAXgene proporciona tres protocolos para la purificación de ADN genómico de tejidos fijados y estabilizados en contenedores de tejido PAXgene.

La lisis de la muestra de tejido se realiza en el tampón de lisis TD1, con digestión con proteinasa K. Las condiciones de tampón se ajustan con el tampón de unión TD2 y etanol para lograr condiciones óptimas de unión al ADN, y el lisado se carga en la columna de centrifugación de ADN PAXgene. Durante la centrifugación, el ADN se une selectivamente a la membrana de sílice, dejando pasar los contaminantes. Los contaminantes restantes y los inhibidores enzimáticos se eliminan en dos eficientes pasos de lavado con los tampones de lavado TD3 y TD4, y el ADN se eluye en el tampón de elución TD5 de baja sal, listo para su uso (véase la figura "Procedimiento de ADN tisular PAXgene").

Aplicaciones

- PCR y PCR cuantitativa en tiempo real
- Southern blotting
- Estudios farmacogenómicos
- Descubrimiento de SNP y genotipificación de SNP