Qiagen, 77023, Kit de inicio de suero/plasma exoRNeasy (20)

Para la purificación de ARN total derivado de exosomas de suero/plasma; incluye 20 columnas exoEasy (10 Maxi, 10 Midi) y 20 columnas de centrifugación RNeasy MinElute

Características

- ARN total de alta pureza (incluida la fracción de ARN pequeña) de exosomas y otras vesículas extracelulares (VE)
- Aislamiento de ARN exclusivamente de exosomas, excluyendo el ARN de complejos proteicos no vesiculares
- El cómodo procedimiento en columna proporciona acceso al ARN en solo una hora
- Alta sensibilidad proporcionada por el maxi kit que permite grandes volúmenes de entrada de muestra para detectar ARN de baja abundancia.
- Aislamiento de la mayoría de los biofluidos, incluidos orina, suero, plasma, LCR y sobrenadante de cultivo celular (se requiere tampón XBP adicional)

Detalles del producto

Los kits exoRNeasy utilizan columnas de centrifugación por afinidad de membrana para capturar eficazmente exosomas y otras EV de la mayoría de los biofluidos, como orina, suero, plasma, LCR y sobrenadante de cultivos celulares. Posteriormente, los kits utilizan las probadas columnas de centrifugación RNeasy MinElute para aislar el ARN de las EV. El formato de columna midi permite el procesamiento eficiente de volúmenes de muestra más pequeños (hasta 1 ml de suero/plasma o 4 ml de orina), mientras que el formato de columna maxi permite el uso de grandes volúmenes de muestra (hasta 4 ml de suero/plasma, 16 ml de orina o 32 ml de sobrenadante de cultivos celulares) para detectar ARN de baja abundancia con alta fiabilidad. Los resultados son rápidos, consistentes y muy adecuados para aplicaciones posteriores sensibles. El aislamiento de ARN del protocolo con los kits exoRNeasy puede automatizarse en QIAcube Connect.

¿Necesita un presupuesto para su proyecto de investigación o desea hablar sobre él con nuestro equipo de especialistas? Contáctenos.

¿Quieres probar esta solución por primera vez? Solicita un presupuesto para un kit de prueba.

Actuación

El protocolo de purificación de exosomas y otras vesículas extracelulares con exoRNeasy no solo es más rápido que la ultracentrifugación, sino que también produce una preparación más limpia. La microscopía electrónica de barrido muestra que, si bien ambas técnicas producen vesículas intactas del tamaño esperado, la preparación obtenida mediante ultracentrifugación también contiene muchas estructuras más pequeñas que no se ajustan al tamaño ni la forma esperados para las VE (véase la figura). Las vesículas intactas se eluyen de la membrana exoEasy con mayor pureza en comparación con la ultracentrifugación.

Además, tanto exoRNeasy como el método de ultracentrifugación tradicional ofrecen tamaños y rendimientos similares de ARN grandes y pequeños, según lo medido por el análisis Bioanalyzer (ver figura exoRNeasy aísla ARN pequeños y grandes de vesículas extracelulares en plasma).

Finalmente, exoRNeasy captura todos los ARNm libres de células en el plasma, así como los miARN asociados a EV, como lo confirman los experimentos de RT-qPCR en los ARN purificados con el protocolo exoRNeasy y el flujo de la columna exoEasy (ver la figura exoRNeasy captura todos los ARNm y miARN específicos de vesículas en plasma).

Principio

Los kits exoRNeasy mejoran los métodos tradicionales de aislamiento de microvesículas por ultracentrifugación, obteniendo vesículas extracelulares purificadas en tan solo 20 minutos. Gracias a la tecnología desarrollada con Exosome Diagnostics, Inc., los kits utilizan un formato de columna de centrifugación y tampones especializados para capturar exosomas de biofluidos prefiltrados; hasta 32 ml con el kit maxi y 4 ml con el kit midi. A continuación, se extrae el ARN total mediante la tecnología miRNeasy de QIAGEN. El procedimiento completo, desde la muestra hasta el ARN, dura solo una hora.

El kit de inicio de suero/plasma exoRNeasy proporciona columnas exoEasy tanto midi como maxi, lo que permite el análisis en volúmenes variados de biofluidos prefiltrados.

Procedimiento

El procedimiento total para aislar ARN de vesículas extracelulares comprende dos fases: purificación de exosomas y aislamiento de ARN (ver figura El flujo de trabajo del kit exoRNeasy Serum/Plasma Maxi: muestra a microvesículas hasta ARN total en solo 1 hora).

En la etapa de purificación de exosomas, la muestra prefiltrada (excluidas las partículas mayores de 0,8 μm) se mezcla con tampón XBP y se une a una columna de centrifugación por afinidad de membrana exoEasy. Los exosomas unidos se lavan con tampón XWP y, a continuación, se lisan con QIAzol.

En la etapa de extracción de ARN, se añade cloroformo al eluido de QIAzol, y la fase acuosa se recupera y se mezcla con etanol. El ARN total, incluido el miARN, se une a la columna de centrifugación, donde se lava tres veces y se eluye.

Aplicaciones

- Transcriptómica
- Perfil de miRNA
- Perfil de ARNm
- secuenciación de ARN

Los kits exoRNeasy son muy adecuados para aislar ARN total, incluidos ARNm y miARN, de microvesículas encontradas en muestras de biofluidos.

Las aplicaciones incluyen: