Qiagen, 78404, Kits RNeasy PowerFecal Pro

Para 50 preparaciones: 50 tubos PowerBead Pro, 50 columnas de centrifugación de ARN del microbioma, 100 tubos de recolección (2 ml), 50 tubos de elución (1,5 ml), agua sin ARNasa, ADNasa I, reactivos y tampones

Características

- Aislamiento eficiente de ARN microbiano de alta calidad
- Protocolo fácil de usar para aislar ARN total de muestras de microbioma difíciles
- Aislamiento de ARN de alta pureza con tecnología de eliminación de inhibidores
- Automatizable en QIAcube Connect

Detalles del producto

Con el kit RNeasy Powerfecal Pro, puede aislar ARN total de muestras de heces, lodos y aguas residuales con alto contenido de inhibidores de PCR. El kit utiliza la Tecnología de Eliminación de Inhibidores® (IRT) de segunda generación de QIAGEN, lo que resulta en altos rendimientos de ARN de alta pureza, que puede usarse inmediatamente en aplicaciones posteriores, como RT-PCR, qPCR y secuenciación de nueva generación (p. ej., RNA-seq o metatranscriptoma). La tecnología probada de microesferas y la química de lisis completan este protocolo patentado, fácil de usar.

El aislamiento de ARN mediante el kit RNeasy PowerFecal Pro se puede automatizar en QIAcube Connect.

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Actuación

El kit RNeasy PowerFecal Pro permite obtener ARN de alto rendimiento y alta pureza a partir de diversas muestras de microbioma (véanse las figuras Rendimiento de ARN – Cuantificación QIAexpert, Relaciones de pureza de ARN 260/280 y Relaciones de pureza de ARN 260/230). El kit permite la eliminación eficiente de inhibidores de PCR para obtener ARN puro con bajo coaislamiento de inhibidores (véase la figura Calidad del ARN – Inhibición de PCR) y ARN de alta calidad (véanse las figuras Valor RIN, Relación 23S/16S).

Principio

El kit RNeasy PowerFecal Pro aísla eficazmente el ARN total de diversos materiales de partida, como heces, intestino, lodos o aguas residuales. El kit RNeasy PowerFecal Pro proporciona ARN de la más alta calidad con una mínima copurificación del ADN. El kit puede utilizarse para el aislamiento automatizado de ARN en QIAcube Connect.

Es importante conservar las muestras de heces poco después de su recolección para mantener la integridad del ARN. Con PowerProtect DNA/RNA para estabilización, ofrecemos una solución integral, desde la recolección hasta la extracción (véase la figura «Estabilización de muestras y extracción de ARN»).

Procedimiento

Recomendamos comenzar con 50–100 mg de heces. Homogeneice cada muestra en un tubo de microesferas de 2 ml que contenga una mezcla de microesferas de lisis. Las colisiones mecánicas entre las microesferas, combinadas con la disrupción química de las membranas celulares, permiten la lisis de las células huésped y microbianas. Luego, se utiliza IRT para eliminar sustancias que se encuentran comúnmente en muestras de heces, que inhiben la PCR y otras aplicaciones posteriores. Luego, pase el lisado a través de una columna de centrifugación de ARN MB. Retire el ADN mediante digestión con DNasa en columna. Luego, utilice una solución de lavado para eliminar la enzima y cualquier ácido nucleico digerido (consulte la figura Procedimiento RNeasy PowerFecal Pro). Eluya el ARN con agua libre de RNasa. Ahora está listo para usar en cualquier aplicación posterior.

Almacenamiento y conservación de muestras. El rendimiento y la integridad de los ácidos nucleicos aislados de microbios en heces dependen en gran medida del estado del sistema digestivo, la dieta del individuo y el tiempo transcurrido entre la recolección de la muestra y su conservación. Para optimizar la calidad de los ácidos nucleicos de las heces, procese la muestra lo antes posible después de la recolección. El reactivo PowerProtect ADN/ARN estabiliza las muestras de heces a temperatura ambiente.

Procesamiento automatizado en el QIAcube Connect. La purificación de ARN con el kit RNeasy PowerFecal Pro se puede automatizar completamente en el QIAcube Connect o en el QIAcube clásico. El instrumento QIAcube Connect está diseñado para la automatización de bajo rendimiento del flujo de trabajo de preparación de muestras mediante la tecnología de columna de centrifugación. El protocolo automatizado sigue los mismos pasos que un procedimiento manual (es decir, lisar, unir, lavar y eluir), procesando hasta 12 muestras por análisis.

QIAcube Connect está diseñado para la purificación automatizada de ácidos nucleicos y proteínas en aplicaciones de biología molecular. El sistema está diseñado para usuarios profesionales con formación en técnicas de biología molecular y en el funcionamiento de QIAcube Connect.

Aplicaciones

El kit RNeasy PowerFecal Pro permite el aislamiento de ARN de alta calidad que se puede utilizar inmediatamente en aplicaciones posteriores, incluidas RT-PCR, qPCR, PCR digital y secuenciación de próxima generación (por ejemplo, RNA-seq o metatranscriptoma).