Qiagen, 80234, Kit FFPE de ADN/ARN AllPrep (50)

50 columnas de centrifugación RNeasy MinElute, 50 columnas de centrifugación QIAamp MinElute, tubos de recolección, reactivos sin ARNasa y tampones

Características

- Máximo rendimiento con un consumo mínimo de muestra
- Libera ADN/ARN sin comprometer la integridad
- Separa eficazmente el ARN y el ADN.
- Análisis completo de ADN y ARN de la misma muestra FFPE

Detalles del producto

Para una comparación fiable de datos genómicos y transcriptómicos, es esencial la purificación de ADN y ARN de la misma muestra. El kit AllPrep DNA/RNA FFPE utiliza un método de solubilización (pendiente de patente) para purificar ADN y ARN a partir de secciones de tejido fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE). Los analitos purificados son adecuados para su uso en aplicaciones como PCR en tiempo real y pirosecuenciación. El kit se puede automatizar en QIAcube Connect.

Principio

El kit AllPrep ADN/ARN FFPE está especialmente diseñado para la purificación simultánea de ADN genómico y ARN total de secciones de tejido FFPE. El ADN y el ARN puros se obtienen de la muestra completa, a diferencia de otros procedimientos en los que la muestra biológica se divide en dos antes de procesarse por separado. Simplemente dividir una muestra por la mitad para procedimientos separados de purificación de ADN y ARN permite la purificación de ADN y ARN de diferentes poblaciones celulares, cuyas propiedades pueden diferir. La purificación de ADN y ARN de la misma muestra también ayuda a evitar el desperdicio, ya que las muestras FFPE son valiosas, a menudo difíciles de recuperar y su cantidad es limitada.

Debido a las condiciones de fijación e inclusión, los ácidos nucleicos en muestras FFPE suelen estar muy fragmentados y suelen tener un peso molecular inferior al de los obtenidos a partir de muestras frescas o congeladas. Un obstáculo importante para aislar ADN y ARN de la misma muestra FFPE es que el ADN fragmentado es corto y puede ser parcialmente monocatenario, por lo que se asemeja más al ARN que al ADN intacto. Esta propiedad del ADN fragmentado dificulta la separación física del ADN y el ARN. El kit AllPrep DNA/RNA FFPE utiliza un método de solubilización (patente en trámite) para liberar de forma diferencial el ADN y el ARN de una sola muestra FFPE.

Los ácidos nucleicos en muestras FFPE también se modifican químicamente con formaldehído. Si bien la modificación por formaldehído no se puede detectar en ensayos de control de calidad estándar, como la electroforesis en gel o el análisis de laboratorio en un chip, sí interfiere considerablemente con los análisis enzimáticos. El kit AllPrep ADN/ARN FFPE está optimizado para revertir la mayor cantidad posible de modificación por formaldehído sin degradar aún más el ADN y el ARN.

Aplicaciones

El kit AllPrep ADN/ARN FFPE está optimizado para revertir la mayor cantidad posible de modificación con formaldehído sin degradar aún más el ADN ni el ARN. Sin embargo, los ácidos nucleicos purificados a partir de muestras FFPE no deben utilizarse en aplicaciones posteriores que requieran ADN de alto peso molecular o ARN completo. Algunas aplicaciones pueden requerir modificaciones para permitir el uso de ácidos nucleicos fragmentados (p. ej., el diseño de amplicones pequeños para PCR y RT-PCR). Para la síntesis de ADNc, se deben utilizar cebadores específicos para cada gen en lugar de cebadores oligo-dT. Si no es posible utilizar cebadores específicos para cada gen, se deben utilizar cebadores aleatorios.