Qiagen, 870121, kit de PCR therascreen EGFR RGQ (24)

Para 24 reacciones: 1 ensayo de control, 7 ensayos de mutación, control positivo, agua, Taq ADN polimerasa

Características

- Aprobado por la FDA para uso diagnóstico in vitro con GILOTRIF o IRESSA
- Sistema listo para usar con flujo de trabajo sencillo
- Específico y sensible gracias a las tecnologías PCR ARMS y Scorpions

Principio

El kit therascreen EGFR RGQ PCR es una prueba de PCR en tiempo real para la detección cualitativa de deleciones en el exón 19 y mutaciones por sustitución en el exón 21 (L858R) del gen del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) en ADN derivado de tejido tumoral de cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPNM) fijado en formalina e incluido en parafina (FFPE). La prueba está diseñada para seleccionar pacientes con CPNM en quienes están indicados los inhibidores de la tirosina quinasa (ITC) del EGFR GILOTRIF (afatinib) o IRESSA (gefitinib). No se ha establecido la seguridad ni la eficacia de GILOTRIF (afatinib) en pacientes cuyos tumores presentan inserciones en el exón 20 y mutaciones T790M. No se ha establecido la seguridad ni la eficacia de IRESSA (gefitinib) en pacientes cuyos tumores presentan mutaciones L861Q, G719X, S768I, inserciones en el exón 20 y T790M. Estas mutaciones del EGFR también se detectan con el kit therascreen EGFR RGQ PCR.

BRAZOS

La amplificación específica de alelos o mutaciones se logra mediante ARMS (Sistema de Mutación Refractaria a la Amplificación). Los cebadores ARMS se anillan preferentemente con el ADN que contiene la mutación y permiten que la ADN polimerasa Taq inicie la PCR, diferenciando eficazmente entre una coincidencia y una discordancia en el extremo 3' del cebador. Las secuencias mutadas específicas se amplifican selectivamente, incluso en muestras donde la mayoría de las secuencias no presentan la mutación. Cuando el cebador está completamente coincidente, la amplificación se realiza con plena eficiencia. Cuando la base 3' está discordante, solo se produce una amplificación de fondo de bajo nivel.

Escorpiones

La detección de la amplificación se realiza mediante Scorpions. Los Scorpions son moléculas bifuncionales que contienen un cebador de PCR unido covalentemente a una sonda. La tecnología utiliza un método basado en la fluorescencia para indicar la presencia de la mutación. El cebador Scorpion hibrida con una secuencia de ADN aguas arriba de la región diana. Posteriormente, la Taq ADN polimerasa extiende el cebador y copia la región diana. La región recién copiada es complementaria a la región de la sonda de Scorpion. Tras un aumento de temperatura en el ciclador de PCR en tiempo real, el cebador Scorpions extendido se desnaturaliza. Al enfriarse la solución, la sonda Scorpions se autohibrida. El fluoróforo se separa del extintor y se genera una señal de fluorescencia.

Procedimiento

Extraiga muestras de ADN de tejido tumoral de CPNM FFPE obtenido de pacientes con CPNM utilizando el kit QIAamp DSP DNA FFPE Tissue, validado para su uso con el kit therascreen EGFR RGQ PCR. El kit therascreen EGFR RGQ PCR utiliza un procedimiento de dos pasos. El primero consiste en realizar el ensayo de control para evaluar el ADN total amplificable en una muestra. El segundo paso consiste en realizar pruebas con los ensayos de mutación para detectar la presencia o ausencia de mutaciones del EGFR.

Aplicaciones

Mutación: Exón
Eliminaciones: 19
2235_2249del15: 6223
2236_2250del15: 6225
2239_2253del15: 6254
2239_2256del18: 6255
2240_2254del15: 12369
2240_2257del18: 12370
2239_2248TTAAGAGAAG>C: 12382
2239_2251>C: 12383
2237_2255>T: 12384
2239_2258>CA: 12387
2238_2252>GCA: 12419
2238_2248>GC: 12422
2235_2252>AAT: 13551
L858R: 21
T790M**: 20
L861Q*: 21
G719A*: 18
S768I*: 20
Inserciones**: 20
2310_2311insGGT: 12378

El kit therascreen EGFR RGQ PCR permite la detección de 21 mutaciones del gen EGFR humano mediante ADN extraído de muestras de tejido tumoral de CPNM FFPE. El kit therascreen EGFR RGQ PCR está diseñado exclusivamente para discriminar entre tumores sin mutación de EGFR (tipo salvaje) y tumores con mutaciones de EGFR. Las mutaciones de EGFR detectadas por el kit therascreen EGFR RGQ PCR incluyen:

*No se ha establecido la seguridad y eficacia de IRESSA (gefitinib) para estas mutaciones.

**No se ha establecido la seguridad y eficacia de GILOTRIF (afatinib) e IRESSA (gefitinib) para estas mutaciones.