Qiagen, 870801, Kit de PCR BRAF RGQ (24)

Para 24 reacciones: ensayo de control, 4 ensayos de mutación, control positivo, ADN polimerasa Taq, agua para NTC y agua para dilución de la muestra

Características

- Prueba robusta que puede detectar niveles bajos de ADN mutante
- Sistema listo para usar con flujo de trabajo sencillo
- Detección selectiva y sensible mediante tecnologías ARMS y Scorpions

Principio

- V600E (GAG) y complejo V600E (GAA)
- V600D (GAT)
- V600K (AAG)
- V600R (AGG)

El kit BRAF RGQ PCR constituye un kit listo para usar para la detección de mutaciones somáticas en el oncogén BRAF mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el instrumento Rotor-Gene Q 5plex HRM.

El kit BRAF RGQ PCR permite la detección de las siguientes mutaciones en un contexto de ADN genómico de tipo salvaje.

El kit detecta la presencia del complejo V600E (GAG) y del complejo V600E (GAA) pero no los distingue.

El kit BRAF RGQ PCR utiliza dos tecnologías: ARMS (sistema de mutación refractaria a la amplificación) y Scorpions, para la detección de mutaciones en PCR en tiempo real.

BRAZOS

La amplificación específica de alelos o mutaciones se logra mediante ARMS. La ADN polimerasa Taq es eficaz para distinguir entre una coincidencia y una discordancia en el extremo 3' de un cebador de PCR. Las secuencias mutadas específicas se amplifican selectivamente, incluso en muestras donde la mayoría de las secuencias no presentan la mutación. Cuando el cebador está completamente coincidente, la amplificación se realiza con plena eficiencia. Cuando la base 3' está discordante, solo se produce una amplificación de fondo de bajo nivel.

Escorpiones

La detección de la amplificación se realiza mediante Scorpions. Los Scorpions son moléculas bifuncionales que contienen un cebador de PCR unido covalentemente a una sonda. El fluoróforo de esta sonda interactúa con un extintor, también incorporado a la sonda, que reduce la fluorescencia. Cuando la sonda se une al amplicón durante la PCR, el fluoróforo y el extintor se separan. Esto provoca un aumento de la fluorescencia en el tubo de reacción.

Procedimiento

El kit de PCR BRAF RGQ consta de dos pasos. El primero consiste en realizar el ensayo de control para evaluar el ADN total en una muestra. El segundo consiste en completar el ensayo de mutación para detectar la presencia o ausencia de ADN mutado.

Aplicaciones

El kit BRAF RGQ PCR permite la detección de las siguientes mutaciones en un contexto de ADN genómico de tipo salvaje.