Qiagen, 873001, Kit de PCR IDH1/2 RGQ (20)

Para 20 reacciones: 9 mezclas de cebadores y sondas, control WT, control positivo, mezcla maestra, agua sin nucleasas

Características

- Detección precisa de 7 mutaciones IDH1 y 5 IDH2 mediante fijación por PCR
- Identificación sensible de 3 mutaciones mediante tecnología ARMS PCR
- Un ensayo estandarizado con soluciones listas para usar
- Un flujo de trabajo sencillo con el instrumento Rotor-Gene Q

Principio

Gen: Mutación
IDH1: Arg132His
Arg132Cys: 394C>T
Arg132Ser: 394C>A
Arg132Gly: 394 C>G
Arg132Leu: 395G>T
Arg132Val: 394_395 CG>GT
Arg100Gln: 299G>A
IDH2: Arg172Lys
Arg172Met: 515G>T
Arg172Trp: 514A>T
Arg172Ser: 516G>T
Arg172Gly: 514A>G

- 3 reacciones de amplificación total de los codones 132 y 100 del gen IDH1 y del codón 172 del gen IDH2
- 3 reacciones de amplificación de mutaciones de los codones 132 y 100 del gen IDH1 y del codón 172 del gen IDH2
- 3 reacciones de amplificación específicas de mutación de las mutaciones IDH1 R132H, IDH1 R132C y IDH2 R172K

El kit de PCR IDH1/2 RGQ proporciona reactivos para realizar 9 reacciones de amplificación independientes para la detección de 12 mutaciones:

Mezclas de reacción totales

Las mezclas de cebadores y sondas totales (PPM-Total) utilizan cebadores y sondas para amplificar secuencias objetivo tanto mutadas como de tipo salvaje.

Mezclas de reacción para detección de mutaciones

Los cebadores y mezclas de sondas para detección de mutaciones combinan cebadores y sondas para amplificar secuencias diana tanto mutadas como de tipo salvaje, además de un oligonucleótido bloqueado en 3' con la adición de un grupo fosfato para evitar la elongación (pinzamiento de PCR), que es específico de la secuencia diana de tipo salvaje.

Cuando la plantilla de PCR contiene la secuencia de tipo silvestre, el oligonucleótido 3'-fosfato predomina sobre la unión del cebador de PCR debido a su mayor afinidad. La extensión de la ADN polimerasa es nula o baja, y la amplificación es nula o baja.

Cuando hay una secuencia mutada, la unión del cebador de PCR dominará sobre la unión del oligonucleótido fosfato 3' y continuará la amplificación.

Mezclas de reacción para identificación de mutaciones

La amplificación específica de alelos se logra mediante ARMS (sistema de mutación refractaria a la amplificación), que aprovecha la capacidad de la ADN polimerasa para distinguir entre una coincidencia y una falta de coincidencia en el extremo 3' de un cebador de PCR.

Cuando el cebador de PCR coincide completamente, la amplificación se realiza con plena eficiencia. Si la base 3' no coincide, solo se produce una amplificación de fondo de bajo nivel.