Qiagen, 874601, Kit de PCR EGFR Plus RGQ (24)

Para 24 reacciones: mezcla de T790M y L861Q, mezcla de inserciones y G719X, mezcla de L858R y C797S, mezcla de deleciones y S768I, mezcla maestra de PCR, control positivo de EGFR, agua sin ARNasa ni ADNasa

Características

- Detección precisa y sensible de 42 mutaciones de EGFR en los exones 18, 19, 20 y 21
- Detección específica de los biomarcadores de resistencia clave T790M y C797S
- Flexibilidad para analizar muestras de biopsia líquida y FFPE en la misma ejecución
- Sistema listo para usar con flujo de trabajo simple y automatizable

Detalles del producto

El kit EGFR Plus RGQ PCR es un ensayo exclusivamente para investigación que permite la detección e identificación cualitativa de mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 del gen del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mediante ADN extraído de plasma o tejido tumoral fijado con formalina e incluido en parafina (FFPE). El kit también está diseñado para la medición semicuantitativa de mutaciones somáticas en los exones 18, 20 y 21 del gen EGFR mediante muestras de ADN extraídas de plasma. El ensayo utiliza PCR en tiempo real en el instrumento Rotor-Gene Q 5plex HRM.

Principio

El kit EGFR Plus RGQ PCR proporciona reactivos para reacciones de amplificación por PCR en tiempo real que detectan 42 mutaciones de EGFR. Los ensayos utilizan reacciones específicas de mutación que incluyen ARMS (sistema de mutación refractaria a la amplificación) y diseños de pinza de PCR para detectar mutaciones en ADN derivado de tejido tumoral FFPE y plasma de cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPNM).

Durante la PCR, si la diana de interés está presente, tanto los cebadores directos como los inversos se annealizan específicamente y flanquean la sonda. La actividad exonucleasa 5'→3' de la ADN polimerasa escinde la sonda entre el reportero y el extintor solo si los tres oligonucleótidos hibridan con la diana. Los fragmentos de la sonda se separan de la diana y la polimerización de la cadena continúa. El extremo 3' de la sonda se bloquea para evitar su extensión durante la PCR (véase Principio de la reacción). El aumento de la señal de fluorescencia solo se detecta si la secuencia diana es complementaria a los cebadores y la sonda y, por lo tanto, se amplifica durante la PCR.

Procedimiento

El kit EGFR Plus RGQ PCR consta de cuatro ensayos triplex, cada uno con todos los oligonucleótidos (cebadores, sondas y pinza de oligonucleótidos, si corresponde) necesarios para amplificar y detectar las mutaciones de EGFR deseadas. La extracción manual o automatizada de ADN genómico (ADNg) debe realizarse previamente a partir de tejido FFPE o plasma. Si se parte de tejido FFPE, la extracción manual de ADNg se realiza con el kit QIAamp DSP DNA FFPE Tissue (n.° de cat. 60404). Si se parte de plasma, la extracción de ADNcf se realiza con el kit QIAamp DSP Circulating Nucleic Acid (n.° de cat. 61504). En combinación con el instrumento QIAsymphony SP, la extracción automatizada de ADN genómico de muestras FFPE se realiza con el kit QIAsymphony DSP DNA Mini (n.º de cat. 937236), mientras que la extracción automatizada de ADN libre de muestras de plasma se realiza con el kit QIAsymphony DSP Circulating DNA (n.º de cat. 937556). Tras la extracción de ADN genómico, se cuantifica el ADN y se realiza una PCR en el instrumento Rotor-Gene Q. Tras la PCR, el análisis y las llamadas de expresión se realizan manualmente.

Aplicaciones

El kit EGFR Plus RGQ PCR es una prueba de PCR cualitativa en tiempo real en el instrumento Rotor-Gene Q 5plex HRM, que utiliza tecnologías ARMS y clamp para la detección e identificación de mutaciones (exones 18, 19, 20 y 21) y la medición semicuantitativa de mutaciones somáticas (exones 18, 20 y 21) en el gen EGFR.