Qiagen, 931306, Kit QIAsymphony de lisado de bisulfito (192)

Para 192 preparaciones. Kit de lisis EpiTect Fast LyseAll: 4 tampones EL de 25 ml, 4 tampones FTB de lisis de 0,8 ml, 4 proteinasa K de 0,65 ml; Kit de bisulfito QIAsymphony: 12 soluciones de bisulfito de 1,5 ml, 4 tampones DNA Protect de 1,9 ml, 2 cartuchos de reactivos, 2 gradillas para enzimas, 2 tapas perforantes, 20 ml de tampón ATE, 310 µg de ARN transportador, 2 juegos de sellos reutilizables.
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Características

- Conversión de bisulfito combinada, rápida y optimizada, y purificación de ADN
- Aislar directamente ADN purificado, convertido con bisulfito, sin pasos intermedios
- Produce ADN convertido con bisulfito de alta calidad, adecuado para aplicaciones de pirosecuenciación, PCR o NGS.
- Altas tasas de conversión de citosina de más del 99%

Detalles del producto

Los kits de bisulfito QIAsymphony ofrecen un procedimiento rápido y optimizado para la conversión y purificación eficientes con bisulfito de ADN preparado a partir de muestras de sangre, células o tejidos fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE). Los kits permiten una conversión altamente eficiente de citosinas no metiladas a uracilos en tan solo 30 minutos, a la vez que ofrecen una excelente flexibilidad en la elección del material de partida. Con el instrumento QIAsymphony SP, aísle ADN genómico de alta calidad, apto para su uso directo en aplicaciones posteriores, como pirosecuenciación, PCR o NGS, o para su almacenamiento para su uso posterior.

Actuación

Conversión de bisulfito de alta eficiencia

El estado de metilación de una secuencia de ADN se determina mejor mediante la conversión con bisulfito. El tratamiento con bisulfito del ADN diana produce la conversión de los residuos de citosina no metilados en uracilo, manteniendo inalteradas las citosinas metiladas. Por lo tanto, el tratamiento con bisulfito da lugar a secuencias de ADN diferentes para el ADN metilado y no metilado. El tratamiento con bisulfito del ADN es el paso más crítico en el análisis de metilación, ya que la eficiencia de la reacción afectará considerablemente la fiabilidad de los análisis posteriores. Los kits de bisulfito QIAsymphony contienen una innovadora solución de bisulfito, que permite una conversión ultrarrápida y altamente eficiente.

Fragmentación reducida del ADN

Las duras condiciones necesarias para la conversión completa del bisulfito suelen provocar un alto grado de fragmentación del ADN y pérdida de muestras, lo que resulta en un bajo rendimiento de ADN, ADN altamente fragmentado y tasas de conversión irreproducibles. El exclusivo tampón DNA Protect de QIAGEN previene la degradación del ADN, lo que resulta en un ADN completamente convertido con fragmentos de tamaño mucho mayor.

Amplio espectro de aceptación y aplicación de muestras

Si bien se utilizan protocolos distintos para cortes FFPE, sangre completa y cultivos celulares o tejidos, estos protocolos alcanzan las mismas tasas de conversión de citosina y producen recuperaciones de ADN iguales tras la purificación del ADN convertido, independientemente de las cantidades iniciales de ADN. El ADN purificado está listo para su uso en aplicaciones posteriores. El ADN eluido y convertido con bisulfito es apto para todas las técnicas utilizadas actualmente para el análisis de la metilación del ADN, incluyendo PCR, PCR en tiempo real, PCR específica para metilación, secuenciación con bisulfito (directa y por clonación), COBRA, pirosecuenciación y aplicaciones de NGS.

Principio

La conversión rápida y completa del ADN de muestra con bisulfito es esencial para un análisis preciso de la metilación del ADN. Los kits de bisulfito QIAsymphony incluyen una innovadora solución de bisulfito que permite una conversión altamente eficiente en tan solo 30 minutos. Los protocolos optimizados de lisis y conversión de muestras permiten una purificación y conversión del ADN con bisulfito eficientes, mientras que la exclusiva tecnología DNA Protect minimiza la fragmentación del ADN durante el tratamiento con bisulfito. Los tres kits de bisulfito QIAsymphony están interconectados y funcionan como un sistema integrado de soluciones para la conversión directa de ADN con bisulfito a partir de una amplia gama de materiales de partida.

Conversión rápida de bisulfito

Los kits de bisulfito QIAsymphony ofrecen un procedimiento rápido y optimizado para la conversión y purificación eficientes de ADN preparado a partir de ADN genómico, FFPE, sangre, células o muestras de tejido. Los kits contienen una solución de bisulfito altamente concentrada, que reduce el tiempo necesario para convertir los residuos de citosina no metilados en uracilo de varias horas a tan solo 30 minutos, así como tampones de preparación que evitan el aislamiento del ADN antes del tratamiento con bisulfito. Además, el programa de ciclado térmico con bisulfito proporciona una serie optimizada de pasos de incubación necesarios para la desnaturalización térmica del ADN y la posterior sulfonación y desaminación de la citosina, lo que permite altas tasas de conversión de citosina superiores al 99 %. La desulfonación, el paso final en la conversión química de las citosinas, se logra mediante un práctico paso en microesferas incluido en el procedimiento de purificación del QIAsymphony SP.

Tampón de protección de ADN

La conversión rápida y completa del ADN de la muestra con bisulfito es el paso más crítico para la correcta determinación de un patrón de metilación. Esto se logra incubando el ADN en altas concentraciones de sal de bisulfito a alta temperatura y bajo pH. Estas duras condiciones suelen provocar un alto grado de fragmentación del ADN y la consiguiente pérdida de ADN durante la purificación. Los procedimientos habituales con bisulfito suelen requerir grandes cantidades de ADN de entrada para compensar la degradación y la pérdida de ADN durante la conversión, lo que a menudo resulta en un bajo rendimiento de ADN, un ADN altamente fragmentado y tasas de conversión irreproducibles. Con los kits de bisulfito QIAsymphony, la fragmentación del ADN se previene durante la conversión con bisulfito gracias al exclusivo tampón DNA Protect, formulado específicamente para prevenir la fragmentación que suele asociarse con el tratamiento del ADN con bisulfito a altas temperaturas y bajo pH. Además, proporciona una desnaturalización eficaz del ADN, obteniendo el ADN monocatenario necesario para la conversión completa de citosina. El tampón DNA Protect también contiene un práctico colorante indicador de pH como control de mezcla, lo que permite confirmar el pH correcto para la conversión de citosina.

Procedimiento QIAsymphony

El procedimiento del kit de bisulfito QIAsymphony simplifica la preparación y el aislamiento de muestras tras la conversión de bisulfito con el instrumento QIAsymphony SP (véase la figura "Esquema del principio del QIAsymphony SP"). El QIAsymphony SP le ahorra tiempo al procesar de 1 a 96 muestras en lotes de 24. La tecnología QIAsymphony combina la velocidad y la eficiencia de la purificación con sílice con la cómoda manipulación de partículas magnéticas.

Desparafinación de muestras FFPE

El primer paso para extraer ADN de muestras FFPE es la desparafinación, que consiste en disolver y eliminar la parafina, exponiendo las muestras para su posterior tratamiento con tampón de lisis y proteinasa K. Con el kit QIAsymphony Bisulfite FFPE, la desparafinación, la lisis y la desreticulación de los cortes FFPE se optimizan gracias a la solución de desparafinación, un producto químico innovador que facilita la desparafinación con mínima manipulación. La solución de desparafinación contribuye a una alta tasa de recuperación de ADN, ya que permanece en la muestra mientras se realiza la digestión con proteinasa K. Al no ser necesario sedimentar la muestra FFPE ni eliminar el sobrenadante parafinoso, se evita el riesgo de pérdida de muestra durante la desparafinación.

Procedimiento

El procedimiento del kit QIAsymphony Bisulfite simplifica la preparación y el aislamiento de muestras tras la conversión con bisulfito mediante el instrumento QIAsymphony SP (véase la figura "Esquema del principio del QIAsymphony SP"). Consta de unos sencillos pasos: preparación del ADN a partir de la muestra, conversión de citosinas no metiladas mediante bisulfito (véase la figura "Configuración de la reacción con bisulfito"), transferencia de la muestra al módulo QIAsymphony SP, unión automática del ADN monocatenario convertido a las microesferas magnéticas, lavado, desulfonación del ADN unido a las microesferas, lavado del ADN unido a las microesferas para eliminar el agente de desulfonación y elución del ADN puro y convertido de las microesferas (véase la figura "Conversión automática con bisulfito en un QIAsymphony SP").

La preparación de muestras difiere según el tipo de corte, sangre completa, cultivos celulares o tejidos, mientras que el procedimiento de conversión con bisulfito del ADN extraído es el mismo para todos los tipos de muestra. Todos los protocolos alcanzan las mismas tasas de conversión de citosina y producen la misma recuperación de ADN tras la purificación del ADN convertido, independientemente de las cantidades iniciales de ADN.

Kit de bisulfito QIAsymphony

El kit de bisulfito QIAsymphony incluye tampones y reactivos cuidadosamente formulados para facilitar la conversión de ADN genómico con bisulfito de forma eficiente y eficiente, así como la posterior purificación del ADN convertido. La novedosa solución de bisulfito permite la conversión completa en tan solo 30 minutos, mientras que la tecnología DNA Protect permite la generación de ADN completamente convertido con una degradación mínima. El kit de bisulfito QIAsymphony puede utilizarse para la conversión de 1 ng–2 µg de ADN en un volumen de hasta 20 µl o de 1–500 ng en un volumen máximo de 40 µl.

Kit FFPE de bisulfito QIAsymphony

Los tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina (FFPE) se procesan con el kit QIAsymphony Bisulfite FFPE, que consta del kit EpiTect Fast FFPE Lysis, que contiene tampones especializados para una desparafinización y lisis eficientes de cortes de tejido FFPE, y del kit QIAsymphony Bisulfite para una conversión rápida y eficaz con bisulfito del ADN extraído. El protocolo incluye un paso optimizado para facilitar la unión del ADN y puede utilizarse con cortes individuales de tejido FFPE (10 µm de grosor). La fragmentación del ADN que inevitablemente se produce al extraer ADN de tejidos FFPE se ve agravada por las duras condiciones del tratamiento posterior con bisulfito. La fiable tecnología DNA Protect de QIAGEN minimiza la fragmentación durante la reacción de conversión, lo que resulta en una mayor producción de ADN convertido con bisulfito.

Kit de lisado de bisulfito QIAsymphony

Las muestras de sangre completa, células cultivadas o tejido se procesan con el kit QIAsymphony Bisulfite LyseAll, que consta del kit de lisis EpiTect Fast LyseAll con un innovador tampón de lisis y el kit QIAsymphony Bisulfite para la conversión con bisulfito del ADN extraído. El protocolo incluye un paso optimizado para facilitar la unión del ADN, junto con tampones de lisis de fórmula única para optimizar la liberación del ADN de las muestras. Este kit puede utilizarse con 0,5–20 µl de sangre o 10–10⁻¹ células (tan solo 60 pg de ADN).

Aplicaciones

- PCR: de punto final, en tiempo real y específica de metilación
- Secuenciación por bisulfito (directa y clonación)
- NGS
- Pirosecuenciación
- COBRA (Análisis de restricción de bisulfito combinado)

Los kits de bisulfito QIAsymphony ofrecen una conversión de bisulfito rápida y eficiente de ADN a partir de diversos materiales de partida, lo que es muy adecuado para todas las técnicas que se utilizan actualmente para el análisis de la metilación del ADN, incluidos: