Qiagen, 952134, Kit de preparación y separación de ADN EZ2 para investigadores (48)

Para 48 preparaciones en el EZ2 Connect Fx: cartuchos de reactivos (Investigator Sep&Prep), puntas de filtro desechables y portapuntas, tubos, QIAshredder, interfaz de usuario de reactivos, tampón de lisis, tampón de elución, proteinasa K y agua libre de nucleasas

Características

- Extracción diferencial de 1 a 24 muestras de agresión sexual en el instrumento EZ2 Connect Fx
- Separación efectiva entre el ADN derivado de los espermatozoides y el ADN procedente de células no espermáticas.
- Alta recuperación de ADN de células espermáticas incluso de muestras difíciles
- Utilización directa de fracciones de esperma sin necesidad de purificación adicional
- Tiempo de intervención reducido y gran facilidad de uso en comparación con los métodos manuales tradicionales.

Detalles del producto

Las muestras de agresión sexual suelen estar compuestas por una mezcla de células espermáticas y no espermáticas de varios individuos. El kit EZ2 DNA Investigator Sep&Prep se basa en el principio de extracción diferencial, que aprovecha las diferentes propiedades de las células espermáticas y de todas las demás células presentes en las muestras de agresión sexual. Esto permite generar perfiles individuales del agresor del que proceden las células espermáticas. El kit EZ2 DNA Investigator Sep&Prep contiene todos los reactivos y el material de laboratorio necesarios para separar la fracción espermática de la fracción no espermática y automatizar la purificación del ADN genómico derivado de espermatozoides en el instrumento EZ2 Connect Fx. La tecnología de partículas magnéticas proporciona ADN de alta calidad a partir de la fracción espermática, apto para su uso directo en aplicaciones posteriores. EZ2 Connect Fx realiza todos los pasos del procedimiento de separación y preparación de muestras de hasta 24 muestras en una sola ejecución de aproximadamente 70 minutos. El flujo de trabajo automatizado proporciona un tiempo de trabajo práctico reducido, una gran facilidad de uso, un mayor rendimiento y resultados altamente reproducibles en un corto tiempo de ejecución para satisfacer la mayor demanda de análisis oportuno de kits de evidencia de agresión sexual y el procesamiento de retrasos.

Para la purificación de las fracciones no espermáticas (NSF), recomendamos el uso del kit EZ1&2 DNA Investigator, que puede realizarse directamente después en el mismo instrumento EZ2 Connect Fx o en un momento posterior.

El kit Sep&Prep EZ2 DNA Investigator cumple con los requisitos de la norma ISO 18385.

Actuación

El kit EZ2 DNA Investigator Sep&Prep se caracteriza por una mejor recuperación del ADN espermático y una separación precisa entre el ADN derivado del esperma y el ADN procedente de células no espermáticas (véase la figura "Relación de ADN humano:masculino en las fracciones espermáticas" y la figura "Separación precisa incluso con muestras complejas"). Es muy eficaz en el manejo de muestras complejas con alto contenido de ADN femenino y bajo de ADN masculino, y permite generar perfiles unipersonales o mixtos con un componente masculino mayoritario distintivo, que a menudo resultan en perfiles STR mixtos con otros métodos (véase la figura "Perfiles distintivos de muestras mixtas").

Principio

Característica: Detalles
Reacciones por kit: 48
Tipo de muestra: Muestras de agresión sexual, por ejemplo, hisopos poscoitales, hisopos vaginales o bucales con semen, espermatozoides mezclados con diferentes tipos de células, eyaculación en telas, etc.
Procesamiento: Automatizado
Compatibilidad: EZ2 Connect Fx
Tecnología: Partículas magnéticas
Volumen de muestra: 500 µL
Volúmenes de elución: 50 µL, 100 µL
Tiempo por ejecución del instrumento: aprox. 70 min, incluida la eliminación de NSF*, pasos de lavado, preparación de ADN, inactivación de ProtK
Tiempo total: extractos de fracción de esperma listos para PCR en aproximadamente 2,5 horas
Resultado: ADN derivado de esperma listo para usar, fracción no espermática †
Análisis posterior: qPCR, dPCR, STR, NGS

EZ2 Connect Fx permite la separación totalmente automatizada de la fracción no espermática de la fracción espermática y la preparación de ADN genómico derivado de espermatozoides mediante partículas magnéticas recubiertas de sílice. La tecnología de partículas magnéticas elimina los tediosos pasos de centrifugación, y este instrumento fácil de usar permite la purificación de 1 a 24 muestras en una sola ejecución. El bloqueo automático de la puerta del instrumento, controlado por sensor, y el uso de cartuchos de reactivos sellados reducen el riesgo de contaminación ambiental. Además, el flujo de trabajo simplificado y optimizado reduce aún más el riesgo de errores de procesamiento y la variabilidad entre usuarios, que puede ocurrir con la extracción diferencial manual, según Gill et., 1975 (1).

(1): Gill P, Jeffreys AJ, Werrett DJ (1985) Aplicación forense de huellas de ADN. Nature 318:577–579

Características del kit de preparación y separación de ADN EZ2 DNA Investigator

*NSF = Fracción no espermática.

† La fracción no espermática se puede almacenar o purificar con el kit EZ1&2 DNA Investigator (48) en el mismo instrumento.

Procedimiento

Las muestras mixtas de agresión sexual, compuestas por células espermáticas y no espermáticas, se pretratan (primera lisis), se centrifugan y se cargan en el instrumento EZ2 Connect Fx. Tras la eliminación del sobrenadante (fracción no espermática, NSF), el EZ2 Connect Fx realiza una serie de pasos de purificación. El ADN genómico derivado de espermatozoides se eluye y se recoge en el tubo de elución, en la posición D del rack. Está listo para cualquier aplicación posterior (qPCR, STR, NGS). Las fracciones no espermáticas están disponibles en el tubo de muestra, en la posición A del rack. Estas pueden purificarse inmediatamente con el kit EZ1&2 DNA Investigator en el mismo instrumento (sin cambiar la posición del rack) o extraerse y almacenarse para su purificación posterior (véase "Descripción general del flujo de trabajo"). Los protocolos opcionales para la tinción de espermatozoides o el inmunoensayo cromatográfico (p. ej., PSA) pueden combinarse con el flujo de trabajo Sep&Prep.

Aplicaciones

- Cuantificación de ADN (qPCR, dPCR)
- Genotipificación de STR y SNP basada en CE o NGS

El ADN de alta calidad obtenido de la fracción de esperma de muestras de agresión sexual procesadas con el kit EZ2 DNA Investigator Sep&Prep es ideal para: