Qiagen, 959035, Kit de tejido/células de ARN/miARN EZ2 (48)

Para 48 preparaciones: cartucho de tejido/células EZ2 RNA/miRNA, puntas de filtro y soportes, tubos, DNasa sin ARNasa, tampón RLT, proteinasa K

Características

- Purifica ARN y miARN de células y tejidos humanos y animales.
- No utiliza fenol tóxico.
- Incluye eliminación enzimática altamente eficiente de proteínas y ADNg.
- Le permite procesar hasta 24 muestras al mismo tiempo, para una fácil comparación entre análisis.
- Evita la contaminación por ARNasa con cartuchos precargados y plataforma de trabajo cerrada

Detalles del producto

El kit EZ2 de ARN/miARN para tejidos y células facilita y garantiza la purificación de ARN total, incluyendo miARN y otros ARN pequeños, a partir de células cultivadas y diversos tejidos humanos o animales. El proceso no requiere el uso de fenoles y, una vez finalizada la lisis, todos los pasos restantes se automatizan con cualquier instrumento EZ2 Connect.

Actuación

El protocolo EZ2 RNA/miRNA Tissue/Cells aísla una cantidad similar de ARN total, incluyendo ARN pequeño, que los protocolos manuales basados ​​en columnas. Esto es válido incluso para tipos de tejido complejos como el tejido fibroso (p. ej., músculo) o el tejido graso (p. ej., cerebro) (véase Recuperación de miRNA comparable). La eliminación de ADN genómico también es comparable a la purificación manual basada en columnas (véase Recuperación eficiente de ARNm y eliminación de ADNg). El análisis de PCR digital muestra una mayor concentración de ARN en las muestras procesadas con el kit EZ2 RNA/miRNA Tissue/Cells (véase Mayor concentración de ARN).

Principio

El protocolo EZ2 ARN/miARN Tejido/Células utiliza lisis manual en tampón RLT para proteger las moléculas de ARN. La digestión con proteinasa K garantiza la lisis completa incluso en tejidos difíciles de lisar. Los pasos de unión, lavado y elución están automatizados en un instrumento EZ2 Connect, que utiliza tecnología de microesferas magnéticas. Tras la primera unión, el ARN se trata con DNasa para digerir el ADN genómico contaminante y luego se reenlaza a las microesferas magnéticas. Los pasos de lavado eliminan los contaminantes que podrían interferir con las reacciones enzimáticas posteriores.

Procedimiento

Primero se homogeneiza el pellet celular o el cultivo celular, o bien se rompe la muestra de tejido y luego se homogeneiza. A continuación, se añade agua sin ARNasa y proteinasa K, y la mezcla se incuba durante 10 minutos a temperatura ambiente (véase el flujo de trabajo de tejido/células de ARN/miARN EZ2).

Tras la incubación, se cargan las muestras y los cartuchos de reactivo precargados en el EZ2 Connect y se inicia la ejecución de la aplicación. Una vez finalizada la ejecución, el ARN o miARN purificado estará listo para aplicaciones posteriores (consulte el flujo de trabajo de ARN/miARN en tejido/células del EZ2).

Aplicaciones

El ARN y miARN purificados con el kit EZ2 RNA/miRNA Tissue/Cells es muy adecuado para RT-PCR, PCR digital (dPCR) o secuenciación de próxima generación (NGS).