Qiagen, 967152, Kit RNeasy 96 BioRobot 8000 (12)

Para preparaciones de ARN total de 12 x 96 en el sistema BioRobot 8000 o BioRobot Universal: 12 placas RNeasy 96, microtubos de elución CL, tapas, bloques S, reactivos y tampones sin ARNasa

Características

- Altos rendimientos de ARN total de células y todos los tejidos.
- Procesamiento de muestras rápido y cómodo
- ARN puro de alta calidad sin contaminación por fenol
- ARN de alto rendimiento para todas las aplicaciones posteriores

Detalles del producto

Los kits RNeasy 96 BioRobot permiten la purificación total de ARN en formato de 96 pocillos para instrumentos BioRobot a partir de muestras de células cultivadas y cualquier tejido. Los tejidos se lisan y homogeneizan eficientemente con el reactivo de lisis QIAzol, mientras que las células se lisan en el tampón RLT. El ARN de alta calidad se purifica a partir de tejidos y células utilizando placas RNeasy 96 con membrana de sílice. La purificación automatizada se realiza mediante el sistema BioRobot Universal, que procesa hasta 96 o 192 muestras por ciclo, seguido de una configuración de RT-PCR en tiempo real. Las muestras de tejido se pueden estabilizar fácilmente con el reactivo tisular Allprotect y se pueden desintegrar eficientemente con el TissueLyser II. Los tejidos no grasos se pueden estabilizar con el reactivo tisular RNAprotect.

Actuación

Tejido: Rendimiento de ARN* (µg por 10 mg de tejido)
Riñón: 5–40
Hígado: 15–80
Pulmón: 5–15
Corazón: 5–25
Músculo: 5–35
Cerebro: 5–20
Tejido adiposo: 0,5–2,5
Bazo: 15–100
Intestino: 10–60
Piel: 2–5

El sistema RNeasy 96 proporciona una purificación rápida y reproducible de ARN total en formato de 96 pocillos para instrumentos BioRobot, lo que permite la elaboración de perfiles de expresión génica de alto rendimiento. Este ARN es adecuado para aplicaciones sensibles como la RT-PCR cuantitativa en tiempo real y el análisis de microarrays (véase la figura "ARN de alta calidad para el análisis sensible de un transcrito con bajo número de copias"). Los tamaños de muestra varían de 10 a 5 x 10⁻¹ células (véase la figura "RT-PCR de ARN de tan solo 100 células"), y se puede purificar ARN de alta calidad a partir de un gran número de muestras (véase la figura "Rendimiento reproducible de ARN de alta calidad"). Las variaciones individuales son bajas durante todo el proceso de purificación; los valores de ciclo umbral TaqMan® se alcanzan fácilmente al final del proceso con un coeficiente de variación (CV) inferior al 3 % utilizando el kit de RT-PCR QuantiTect Probe (véase la figura "Repetibilidad de la purificación de ARN totalmente automatizada").

En comparación con los procedimientos estándar con membrana de sílice, el sistema RNeasy 96 proporciona mayores rendimientos de ARN total para todos los tipos de tejido (consulte la tabla “Rendimientos típicos de ARN total utilizando el kit de tejido universal RNeasy 96”).

Rendimientos típicos de ARN total utilizando el kit de tejido universal RNeasy 96

Se puede aislar ARN de alta calidad a partir de tejidos conservados mediante congelación o estabilización con RNAprotect a temperatura ambiente (véase la figura "ARN total de alta calidad de hígado y tejido muscular de rata"). El ARN intacto purificado a partir de tejidos fibrosos y grasos difíciles de lisar es adecuado para aplicaciones posteriores (véanse las figuras "ARN de alta calidad de piel/tejido adiposo/hepático/intestinal" y "Análisis en tiempo real de ARN de alta calidad de cerebro de rata").

Principio

Especificación: Detalles
Formato: Placas RNeasy de 96 pocillos con microtubos de recolección de 1,2 ml
Fuente de muestra: células animales o humanas
Tamaño de la muestra: 10–5 x 10 5 células
Capacidad de unión: hasta 100 µg de ARN por pocillo
Rendimiento* de 1 x 10 5 células: HeLa: 1,6 µg LMH: 1,3 µg COS-7: 3,1 µg Huh7: 2,0 µg Jurkat: 1,4 µg
Volumen de elución: 45–140 µl

El kit RNeasy 96 BioRobot 8000 proporciona un método estandarizado, rápido y fiable para el aislamiento de ARN de alta calidad a partir de un gran número de muestras (véase la tabla "Especificaciones del kit RNeasy 96 BioRobot 8000"). La simplicidad del procedimiento es clave para la velocidad y la eficiencia de la tecnología RNeasy 96. Las células pueden cultivarse y lisarse directamente en placas de cultivo celular de 96 pocillos. Tras transferir los lisados ​​a los pocillos de la placa RNeasy 96 (véase la figura "Placa RNeasy de 96 pocillos"), el ARN se une a la membrana de sílice de cada pocillo y se eliminan los contaminantes. El ARN puro se eluye en agua sin ARNasa en tubos de recolección individuales, aptos para el almacenamiento a largo plazo, y está listo para usar en cualquier experimento. Dado que el procedimiento RNeasy enriquece especies de ARN >200 nt, el rendimiento de ARN no incluye ARNr 5S, ARNt u otros ARN de bajo peso molecular.

Especificaciones del kit RNeasy 96 BioRobot 8000

Procedimiento

El aislamiento de ARN total totalmente automatizado con el kit RNeasy 96 BioRobot 8000 se realiza en la estación de trabajo BioRobot 8000 o en el sistema BioRobot Universal. La mesa de trabajo BioRobot tiene capacidad para purificar ARN de hasta 192 muestras en una sola ejecución. Con el protocolo de una sola placa, el sistema puede realizar tanto la purificación de ARN como la configuración de la reacción en una sola ejecución, desde cultivos de células vivas en placas de 96 pocillos hasta mezclas para RT-PCR, listas para usar en análisis de expresión génica en tiempo real. Las puntas con filtro evitan la contaminación cruzada, y la manipulación robótica de precisión proporciona una mínima variación entre pocillos y una alta repetibilidad. La purificación de ARN también puede realizarse manualmente en el colector de vacío QIAvac 96 o en el sistema de centrifugación para placas de 96 pocillos con el kit RNeasy 96.

El kit RNeasy 96 Universal Tissue 8000 integra una eficiente lisis basada en fenol/guanidina y purificación con membrana de sílice con la velocidad del procesamiento al vacío. Tras la homogeneización y la separación de fases, la estación de trabajo BioRobot 8000 o el sistema BioRobot Universal permiten automatizar el procedimiento sin intervención manual, para la purificación total de ARN de todo tipo de tejido animal (véase el diagrama de flujo "Procedimiento RNeasy 96 Universal Tissue 8000").

El tejido se lisa primero de forma eficiente utilizando el reactivo de lisis QIAzol y el TissueLyser II. Esto proporciona una disrupción rápida y paralela de los tejidos y la inactivación de las ARNasas para garantizar la purificación del ARN intacto. Tras la separación de fases por centrifugación, la estación de trabajo BioRobot elimina la fase acuosa y añade etanol para proporcionar las condiciones de unión adecuadas. A continuación, la estación de trabajo aplica la muestra a los pocillos de la placa de tejido universal RNeasy 96, donde el ARN total se une y los contaminantes se eliminan eficazmente. El ARN de alto rendimiento se eluye posteriormente en un pequeño volumen de agua, listo para su uso en cualquier aplicación posterior.

Aplicaciones

- Aplicaciones de ARN de alto rendimiento en el análisis de expresión genética
- Aplicaciones sensibles como RT-PCR cuantitativa en tiempo real
- Investigación farmacológica y toxicológica

El kit RNeasy 96 BioRobot 8000 proporciona constantemente ARN de la más alta calidad para:

La combinación de las tecnologías QIAzol y RNeasy produce ARN de alta pureza sin arrastre de fenol. El ARN purificado con el kit RNeasy 96 Universal Tissue 8000 es apto para todas las aplicaciones posteriores, incluida la RT-PCR en tiempo real.