Qiagen, 970460, Kit de pirograbado KRAS (24)

Para 24 reacciones: cebadores de secuenciación, cebadores de PCR, ADN de control no metilado, mezcla maestra de PCR PyroMark, concentrado CoralLoad, tampones y reactivos.

Características

- Resultados completos en tiempo real
- Cuantificación precisa de mutaciones en el gen KRAS
- Fácil detección de mutaciones complejas
- El contexto de secuencia proporciona un control integrado del ensayo.
- Análisis flexible posterior a la ejecución

Detalles del producto

El kit KRAS Pyro es un kit de detección molecular para la identificación de mutaciones en el gen KRAS. El kit proporciona cebadores y reactivos para la amplificación del gen KRAS, además de tampones, cebadores y reactivos para la detección y cuantificación de mutaciones en tiempo real mediante la tecnología de pirosecuenciación en el sistema PyroMark Q24.

Principio

- Codón 12/13: G12A, G12C, G12D, G12R, G12S, G12V, G13D
- Codón 61: Q61E, Q61H, Q61L, Q61R

El kit KRAS Pyro se utiliza para la medición cuantitativa de mutaciones en los codones 12, 13 y 61 del gen KRAS humano en tiempo real mediante la tecnología de pirosecuenciación del sistema PyroMark Q24. El gen KRAS codifica una proteína que desempeña un papel fundamental en la cascada de señalización del EGFR. Las mutaciones en el gen KRAS pueden afectar la forma en que la proteína estimula estas vías posteriores. KRAS está mutado en aproximadamente el 30 % de todos los tipos de cáncer. Los cánceres con alta frecuencia de mutación en KRAS incluyen el cáncer colorrectal (35 %) y el cáncer de pulmón (18 %).

Se detectan las siguientes mutaciones:

Procedimiento

Tras la PCR con cebadores dirigidos a los codones 12/13 y 61, los amplicones se inmovilizan en microesferas de estreptavidina-sefarosa de alto rendimiento. Se prepara ADN monocatenario y los cebadores de secuenciación correspondientes se annealan con él. Las muestras se analizan en el sistema PyroMark Q24 mediante un archivo de configuración y un archivo de ejecución. El informe del complemento KRAS debe utilizarse para analizar la ejecución. Este informe garantiza el uso de los LD correctos y el uso automático de las diferentes secuencias para detectar todas las mutaciones. Sin embargo, la ejecución también puede analizarse con la herramienta de análisis integrada en el sistema PyroMark Q24 (véase la figura "Rastro del pirograma de una mutación de GGT a GAT en la base 2 del codón 12"). La "Secuencia a analizar" se puede ajustar luego para la detección de mutaciones raras después de la ejecución (ver figuras "Rastro del pirograma de una mutación de GGT a TGT en la base 1 del codón 12" y "Rastro del pirograma del reanálisis de la muestra en la figura anterior").

Aplicaciones

- Codón 12/13: G12A, G12C, G12D, G12R, G12S, G12V, G13D
- Codón 61: Q61E, Q61H, Q61L, Q61R

El kit KRAS Pyro permite un análisis cuantitativo y preciso de mutaciones, aplicable a diversos campos de investigación, como la investigación oncológica y la epigenética. El kit se utiliza para detectar las mutaciones más comunes en los codones 12, 13 y 61 del gen KRAS humano.

Se detectan las siguientes mutaciones: