Qiagen, 970470, Kit de pirometría BRAF (24)

Para 24 reacciones: cebadores de secuenciación, cebadores de PCR, ADN de control no metilado, mezcla maestra de PCR PyroMark, concentrado CoralLoad, tampones y reactivos

Características

- Resultados completos en tiempo real
- Cuantificación precisa de mutaciones en el gen BRAF
- Fácil detección de mutaciones complejas
- El contexto de secuencia proporciona un control integrado del ensayo.
- Análisis flexible posterior a la ejecución

Detalles del producto

El BRAF Pyro Kit es un kit de detección molecular para la identificación de mutaciones en el gen BRAF. El kit proporciona cebadores y reactivos para la amplificación del gen BRAF, además de tampones, cebadores y reactivos para la detección y cuantificación de mutaciones en tiempo real mediante la tecnología de pirosecuenciación en el sistema PyroMark Q24.

Principio

El kit BRAF Pyro se utiliza para la medición cuantitativa de mutaciones de BRAF en los codones 600 y 464-469 del gen BRAF humano en tiempo real mediante pirosecuenciación en el sistema PyroMark Q24. El gen BRAF codifica la quinasa v-raf, homólogo B1 del oncogén viral del sarcoma murino, un protooncogén que actúa aguas abajo del EGFR. Las mutaciones del gen BRAF se encuentran en el 6-8% de todos los cánceres, y con mayor frecuencia en melanoma (50-60%), cáncer colorrectal (10%) y cáncer de tiroides (39%). Aproximadamente el 90% de estas mutaciones son sustituciones V600E.

Procedimiento

El producto consta de dos ensayos: uno para detectar mutaciones en el codón 600 y otro para detectar mutaciones en los codones 464-469 (véase el diagrama de flujo "Ilustración del ensayo BRAF"). Las dos regiones se amplifican por separado mediante PCR y se secuencian a través de la región definida. Las secuencias que rodean las posiciones definidas sirven como picos de normalización y referencia para la cuantificación y la evaluación de la calidad del análisis.

Tras la PCR con cebadores dirigidos al codón 600 y a los codones 464-469, los amplicones se inmovilizan en microesferas de estreptavidina-sefarosa de alto rendimiento. Se prepara ADN monocatenario y los cebadores de secuenciación correspondientes se anelalizan con él. Las muestras se analizan en el sistema PyroMark Q24 utilizando un archivo de configuración de ejecución y un archivo de ejecución (véanse las figuras "Rastro del pirograma de un genotipo normal en el codón 600", "Rastro del pirograma de un genotipo normal en los codones 464-469" y "Rastro del pirograma de una mutación de GTG a GAG en la base 2 del codón 600"). La "Secuencia a analizar" puede ajustarse para la detección de mutaciones raras después de la ejecución.

Aplicaciones

El kit BRAF Pyro se utiliza para la detección de mutaciones en los codones 600 y 464-469 del gen BRAF humano.