Qiagen, 970590, Kit de pirograbado de extensión RAS (24)

Para 24 reacciones: cebadores de secuenciación, cebadores de PCR, ADN de control no metilado, mezcla maestra para PCR PyroMark, concentrado CoralLoad y tampones y reactivos.

Características

- Mutaciones de cubierta en los codones KRAS 59, 61, 117 y 146
- Mutaciones de cubierta en los codones NRAS 12, 13, 59, 61, 117 y 146
- Complemento de software para la interpretación de información de secuencias complejas
- Resultados confiables en tiempos de respuesta cortos

Detalles del producto

El kit RAS Extension Pyro es un kit de detección molecular para la identificación de mutaciones en los exones 3 y 4 del oncogén KRAS y en los exones 2, 3 y 4 del oncogén humano NRAS. El kit contiene cebadores y reactivos para la amplificación de los genes KRAS y NRAS, además de tampones, cebadores y reactivos para la detección y cuantificación de mutaciones en tiempo real mediante la tecnología de pirosecuenciación en el sistema PyroMark Q24.

Actuación

El LOD de las mutaciones cubiertas por el kit Pyro de extensión RAS varía entre el 1,8 % y el 8,8 %.

Principio

Codón: Sustitución de ácido nucleico
Codón 59 de KRAS (GCA): 175G>A
176C>G: A59G
Codón 61 de KRAS (CAA): 183A>C
182A>T: Q61L
182A>G: Q61R
183A>T: Q61H
181C>G: Q61E
Codón 117 de KRAS (AAA): 351A>C
351A>T: K117N
Codón 146 de KRAS (GCA): 436G>A
436G>C: A146P
437C>T: A146V
Codón 12 de NRAS (GGT): 34G>A
34G>T: G12C
34G>C: G12R
35G>A: G12D
35G>T: G12V
35G>C: G12A
Codón 13 de NRAS (GGT): 37G>A
37G>T: G13C
37G>C: G13R
38G>A: G13D
38G>T: G13V
38G>C: G13A
Codón 59 de NRAS (GGT): 175G>A
176C>G: A59G
Codón 61 de NRAS (CAA): 181C>A
182A>G: Q61R
182A>T: Q61L
183A>T: Q61H
183A>C: Q61H
183A>G: Q61Q
Codón 117 de NRAS (AAG): 351G>C
351G>T: K117N
Codón 146 de NRAS (GCC): 436G>A
436G>C: A146P
437C>T: A146V

El kit Pyro de extensión RAS se utiliza para la medición cuantitativa de mutaciones en los exones 3 y 4 del oncogén humano KRAS, y en los exones 2, 3 y 4 del oncogén humano NRAS mediante la tecnología de pirosecuenciación en el sistema PyroMark Q24. Los genes RAS codifican proteínas que desempeñan un papel fundamental en la cascada de señalización del EGFR. Las mutaciones en los genes RAS pueden afectar la forma en que las proteínas estimulan estas vías posteriores.

Se detectan las siguientes mutaciones:

Procedimiento

Para obtener una descripción general de la tecnología de pirosecuenciación, visite nuestro centro de recursos de pirosecuenciación.

El kit RAS Extension Pyro consta de 8 ensayos que cubren las diferentes regiones de interés (véanse la Figura 1. Ensayos del kit RAS Extension Pyro y la Figura 2. Traza del pirograma obtenida tras el análisis de una muestra con genotipo silvestre mediante el ensayo KRAS 146). Las regiones se amplifican por separado mediante PCR y se secuencian a través de la región definida. Las secuencias que rodean las posiciones definidas sirven como picos de normalización y referencia para la cuantificación y la evaluación de la calidad del análisis.

Tras la PCR con cebadores dirigidos a los diferentes codones, los amplicones se inmovilizan en microesferas de estreptavidina-sefarosa de alto rendimiento. Se prepara el ADN monocatenario y los cebadores de secuenciación correspondientes se annealan con él. Las muestras se analizan en el sistema PyroMark Q24 mediante un archivo de configuración y un archivo de ejecución. El informe del complemento de extensión RAS debe utilizarse para analizar la ejecución. Este informe garantiza el uso de los valores correctos del límite de detección (LOD) y el uso automático de las diferentes secuencias para detectar todas las mutaciones (véanse las figuras 3 y 4). Sin embargo, la ejecución también puede analizarse con la herramienta de análisis integrada en el sistema PyroMark Q24. La sección "Secuencia a analizar" puede ajustarse para la detección de mutaciones raras después de la ejecución.

Aplicaciones

El kit RAS Extension Pyro permite el análisis cuantitativo de mutaciones, aplicable a diversos campos de investigación, como la investigación oncológica y la epigenética. Este kit permite la detección cuantitativa de mutaciones en los codones 59, 61, 117 y 146 del oncogén humano KRAS y en los codones 12, 13, 59, 61, 117 y 146 del oncogén humano NRAS, utilizando ADN extraído de tejido humano fijado con formalina e incluido en parafina (FFPE).