Qiagen, 981611, Vapor-Lock (50 ml)

50 ml Vapor-Lock (10–40 µl/reacción)

Características

- Innovadora barrera de encapsulación de PCR hidrofóbica y de baja viscosidad
- Garantiza altas tasas de éxito en aplicaciones de precisión como PCR en tiempo real
- Elimina la necesidad de tapas de tubos, lo que acelera la configuración de la reacción.

Actuación

El uso de Vapor-Lock para la sobreposición de reacciones elimina la necesidad de tapar los tubos. En experimentos que compararon los valores de CT, se obtuvieron resultados similares en reacciones en tubos tapados que en reacciones sobrepuestas con Vapor-Lock en tubos sin tapar (véase la figura "Vapor-Lock elimina la necesidad de tapar los tubos").

Los volúmenes de reacción pequeños (p. ej., los volúmenes de reacción en una placa de 384 pocillos) suelen presentar baja reproducibilidad y son extremadamente difíciles de procesar correctamente en muchos instrumentos de tiempo real. Sin embargo, el ciclador Rotor-Gene Q centrifuga constantemente las muestras durante la ejecución, manteniendo la reacción en el fondo del tubo alineada con la vía óptica (véase la figura "Principio de Vapor-Lock"). Al trabajar con volúmenes de reacción pequeños, es importante evitar la evaporación. Vapor-Lock previene la evaporación y se ha utilizado con éxito para garantizar una amplificación exitosa con volúmenes de reacción tan bajos como 5 µl (véase la figura "Amplificación exitosa con volúmenes de reacción pequeños").

Principio

Característica: Detalles
Propiedades físicas: Apto para PCR; sin contaminantes conocidos, incluidos ADN, ARN, enzimas, metales, sales u otros oligoelementos.
Pureza: Polímero sintético de alto peso molecular; hidrófobo, incoloro, inodoro, no peligroso.
Autofluorescencia: No se detectó ninguna que abarque desde el ultravioleta hasta el infrarrojo (excitación 36–680 nm; emisión 460–712 nm)
Viscosidad: ≥5 centistoke
Presión de vapor: <1 mm Hg
Punto de ebullición: >120°C
Punto de inflamación: <125°C
Solubilidad: <100 ppb

La evaporación puede ocurrir durante el ciclo térmico, lo que resulta en cambios en el volumen de reacción y la concentración de cada componente. Vapor-Lock previene la evaporación, asegurando altas tasas de éxito en aplicaciones de precisión como la PCR cuantitativa en tiempo real y la fusión de alta resolución (HRM). Vapor-Lock se ve y se comporta como un tampón acuoso. Se asienta sobre la fase acuosa, formando una capa sobre la muestra acuosa (véase la figura "Principio de Vapor-Lock"). Vapor-Lock tiene baja viscosidad y baja gravedad específica, lo que permite que gotas acuosas de más de aproximadamente 1 µl caigan fácilmente a través de la capa de Vapor-Lock hasta la muestra acuosa subyacente.

Los largos tiempos de preparación de la reacción, que pueden ocurrir al trabajar con grandes cantidades de muestras en tubos de tiras o placas multipocillo, aumentan el riesgo de evaporación de la muestra, lo que puede comprometer el éxito de un experimento. Vapor-Lock elimina por completo la necesidad de tapas, lo que acelera la preparación de la reacción. Vapor-Lock recubre las muestras, evitando la evaporación y aumentando la fiabilidad de los resultados.

A diferencia del aceite mineral, Vapor-Lock no contamina ni inhibe la PCR. La fluorescencia de fondo de Vapor-Lock es inferior a una unidad de fluorescencia (véase la figura "Autofluorescencia mínima de Vapor-Lock").

Vapor-Lock es totalmente compatible con el instrumento QIAgility para una configuración de reacción automatizada de alta precisión. También es ideal para su uso con el ciclador Rotor-Gene Q.

Procedimiento

Vapor-Lock es compatible con la configuración de reacciones tanto manual como automatizada. Recomendamos añadir Vapor-Lock a los tubos de reacción antes de cualquier componente. Una centrifugación suave durante una ejecución normal con Rotor-Gene Q garantiza la partición completa de Vapor-Lock y los componentes acuosos de la reacción en dos capas (es decir, Vapor-Lock en la parte superior y la mezcla de reacción en la inferior). Si no se utiliza un ciclador Rotor-Gene Q, recomendamos centrifugar brevemente las muestras antes del ciclado.

Aplicaciones

- Análisis de la expresión genética
- Genotipado
- Escaneo de mutaciones

Vapor-Lock es muy adecuado para su uso en aplicaciones de PCR y HRM, que incluyen: