Product Description
Concentración: ≥2 U/μL. Vida útil: 36 meses. Temperatura de almacenamiento: -20 °C sin descongelación. Para almacenamiento prolongado, conservar a -80 °C.
Características
- Altamente activo en un amplio rango de temperatura (10–47 °C)
- Produce actividad a baja temperatura para proteger el ARN o las proteínas.
- Altamente activo en formulaciones de tampón típicas y tiene un amplio rango de pH con un óptimo de 7,0 a 8,0.
- Requiere al menos 2 mM de iones Mg 2+ para una actividad óptima
- Posee inactivación irreversible a baja temperatura (15 minutos a 52°C, 1 mM DTT)
Detalles del producto
La dsDNasa HL (500 U) es una endonucleasa recombinante termolábil de 43,3 kDa derivada de un organismo eucariota de agua fría, expresada en Pichia pastoris. La enzima muestra una alta actividad específica hacia el ADN bicatenario, dejando intacto el ADN o ARN monocatenario en condiciones estándar.
Se suministra con 20 mM Tris-HCl, pH 8,0; 20 mM NaCl; 2 mM MgCl 2 ; 1 mM CaCl 2 ; 50% (v/v) glicerol.
Una unidad se define como la cantidad de enzima que provoca un aumento de la absorbancia a 260 nm de 1,0 en 30 minutos a 37 °C en tampón Tris-HCl 50 mM, pH 8,0 (25 °C) suplementado con 5 mM MgCl 2 , 0,1 mg/ml de BSA y 0,5 mg/mL de ADN de esperma de arenque como sustrato.
Actuación
Ensayo: Especificación
Pureza de la proteína: >90%
Actividad de ARNasa: No se detectó ninguna
Actividad proteolítica: No se detectó ninguna
Principio
La dsDNasa HL se inactiva rápidamente mediante tratamiento térmico a temperaturas moderadas. Está diseñada para aplicaciones donde la presencia de dsDNA influye en los resultados de experimentos en aplicaciones termosensibles. También es beneficiosa para la purificación rápida y segura de muestras de ARN o proteínas del ADN contaminante.
La enzima hidroliza los enlaces fosfodiéster produciendo oligonucleótidos con grupos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo.
Procedimiento
Control de calidad
La concentración de proteínas se determinó mediante densitometría de electroforesis SDS-PAGE utilizando el ensayo de detección de azul de Coomassie.
La presencia de actividad de ARNasa se determinó después de la incubación de 5 U de dsDNasa HL con 1 μg de ARN eucariota total en un volumen de 20 μL durante 1 hora a 37 °C.
La presencia de actividad proteolítica se determinó mediante SDS-PAGE con detección de Azul Coomassie luego de la incubación de 1 μg de BSA con 100 U de enzima durante 20 horas a 37°C.
Un volumen de reacción de 1,575 mL que contiene ADN de esperma de arenque como sustrato se incuba durante 30 minutos a pH 8 y 37 °C con una enzima que degrada el ADN a oligonucleótidos solubles en ácido. Una unidad de la enzima provoca un aumento de 1,0 en la absorbancia a A260.
Aplicaciones
- digestión de dsDNA para plásmidos y ADN genómico
- Purificación rápida de muestras de ARN y proteínas
- Descontaminación de mezclas maestras de PCR, qPCR y otros reactivos de diagnóstico
- Degradación de la plantilla de ADN en reacciones de transcripción
Esto se utiliza para aplicaciones como:
Order Guidelines
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Collaboration
Tony Tang
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